[發明專利]一種重組長效人透明質酸酶、其編碼基因、生產方法及應用

有效

• 申請號: 201310325056.X
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN104342420B
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 惠覓宙;劉珊;吳書音;謝波;張欣
• 申請（專利權）人: 惠覓宙
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;A61K38/47;A61K47/68;A61K47/64
• 代理公司: 北京方韜法業專利代理事務所11303
• 代理人: 馬麗蓮

1.一種生產重組長效人透明質酸酶的方法，所述重組長效人透明質酸酶為人透明質酸酶PH20細胞外部分與人源蛋白的融合蛋白，所述人源蛋白為人白蛋白HSA片段或人免疫球蛋白IgG2Fc片段；人透明質酸酶PH20細胞外部分與人白蛋白HSA片段的融合蛋白為PH20-HSA，其氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；人透明質酸酶PH20細胞外部分與人免疫球蛋白IgG2Fc片段的融合蛋白為PH20-IgFc，其氨基酸序列如SEQ ID No.5所示，其特征在于，所述方法包括：

使用富含GC的動物細胞表達載體pMH3、pMH4或pMH5在中國地倉鼠細胞CHO內表達基因序列SEQ ID No.6或SEQ ID No.7以獲得所述的PH20-HSA融合蛋白或PH20-IgFc融合蛋白，然后進行分離純化即得；所述表達載體pMH3、pMH4或pMH5的基因序列分別如SEQ ID No.8、9、10所示。

2.根據權利要求1所述一種生產重組長效人透明質酸酶的方法，其特征在于，所述PH20-HSA使用Protein A親和純化方法進行分離純化；所述PH20-IgFc采用離子串聯疏水藍膠方法進行分離純化。

3.一種制劑，其特征在于，穩定儲存有應用權利要求1或2所述的方法生產的重組長效人透明質酸酶，所述制劑包括150-1500IU的PH20-HSA或者PH20-IgFc，10mM Na₂HPO₄，0.03％CaCl₂，0.1％EDTA-Na₂，145mM NaCl，0.1％HSA，且pH值為5.5-7.5。

4.一種復方制劑，其特征在于，包括權利要求3所述的穩定儲存有人透明質酸酶的制劑和特定治療藥物。

5.權利要求1或2所述的方法生產的重組長效人透明質酸酶制備配合使用藥物的用途，其特征在于，所述人透明質酸酶制備的配合使用藥物用于在其活性不被降解的情況下傳遞到人白蛋白或人免疫球蛋白結合的組織、器官、部位；或用于將特定治療藥物傳遞到疾病所在的組織、器官或部位。

6.權利要求1或2所述的方法生產的重組長效人透明質酸酶制備化學偶聯劑的用途，所述人透明質酸酶制備的化學偶聯劑用于通過所述重組長效透明質酸酶的IgFc和HSA片段提供非功能位點來化學偶聯診斷劑、顯影劑、藥物、治療用毒素、基因進入疾病組織器官。

7.權利要求1或2所述的方法生產的重組長效人透明質酸酶在工業生產小分子透明質酸中的應用，其特征在于，所述重組長效人透明質酸酶作為工具酶降解大分子透明質酸產生小分子透明質酸。