[發明專利]一種馬纓杜鵑組織培養快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201310324529.4
• 申請日: 2013-07-30
• 公開（公告）號: CN103371103A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 朱春艷;顧宏輝;余金良;朱丹華;盛小光
• 申請（專利權）人: 杭州植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司 33214
• 代理人: 王從友

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，特別是涉及杜鵑花科杜鵑花屬中馬纓杜鵑的快速繁殖方法及其培養基。

背景技術

馬纓杜鵑（Rhododendron?delavayi?Franch），又名馬纓花，別名馬鼻纓、牛血花、狗血花、紅山茶、密桶花，為杜鵑花科杜鵑花屬常綠杜鵑組樹形杜鵑亞組，其主干明顯，花冠鐘形，紅色，葉密背灰白色海綿狀絨毛。馬纓杜鵑一般為小喬木，花大色艷，樹姿優美，觀賞價值高，主要分布于云南、貴州、四川、西藏等西南較高海拔地區，為較易馴化的原生杜鵑種類之一，在園林綠化開發中極具應用價值。

目前，馬纓杜鵑的繁殖方法主要包括靠挖取野生資源，但此方法移栽成活率不高，且對野生資源破壞嚴重。扦插方法因枝條粗壯且受季節影響，不能實現大規模生產。種子播種方法繁殖系數高，但實生苗開花需要至少6年以上，開花周期長，不能滿足園林綠化的廣泛應用。因此采用組織培養技術是實現對馬纓杜鵑大規模繁殖的重要途徑，可以減少對野生資源的破壞，加快原生杜鵑的馴化進程及園林上的應用。

近年來，對馬纓杜鵑的組織培養研究已有較多報道。周艷等（安徽農業科學，2007（35）：9213-9214）、程雪梅等（植物生理學通訊，2008（44）：297-298）、洪怡等（西南大學學報（自然科學版）2012，34（8）：61-66）相繼對馬纓杜鵑進行了組培研究，均獲得了組培苗，但是上述研究均是基于種子發芽后的莖段為外植體，所獲得的組培苗仍要經過多年栽培種植后才能開花。此外，通過種子途徑建立的快繁體系的組培苗生長弱，莖段不夠粗壯，移栽后生長速度慢，因此其組培體系存在一定的缺陷。本發明針對馬纓杜鵑植物學特征，利用已開花的母株莖段為外植體，建立了馬纓杜鵑高效的組培快繁體系，增殖系數控制在5-6倍，培養的組培苗莖段粗壯，并實現了瓶外生根技術。

發明內容

為了解決上述的技術問題，本發明的一個目的是利用已開花植株為外植體，提供一種提高馬纓杜鵑組培效率的培養基及培養方法，為馬纓杜鵑苗木的工廠化繁育提供技術支撐。本發明的另外一個目的是提供一種馬纓杜鵑組織培養快速繁殖培養基。

為了實現上述的第一目的，本發明采用了以下的技術方案：?

一種馬纓杜鵑組織培養快速繁殖方法，該方法按如下步驟進行：

1）外植體的選擇：春季或秋季從已開花馬纓杜鵑母株上剪取帶有4-6個潛伏芽的當年生新發枝條；

2）外植體滅菌：剪去枝條葉片，先用自來水浸泡并沖洗30-60分鐘，用洗潔精洗滌1-2次后吸干；然后，在無菌室超凈臺上用75%酒精消毒15-30秒，用無菌水沖洗3-5遍，再用0.1％氯化汞消毒12-15分鐘，最后用無菌蒸餾水沖洗3-5遍后吸干；

3）新發枝條誘導培養：將滅好菌的枝條切除莖尖，余下的枝條剪成2-3cm長的莖段，每段帶有1-2個腋芽，斜插入誘導培養基中；于23-26℃光16小時，黑8小時培養25-35天后，莖段潛伏芽發育生長出新枝條至2-4cm長；所述的誘導培養基由以下組分構成：WPM基本培養基?+?ZT?3.0-4.0?mg/L?+?NAA0.2-0.4?mg/L?+?20?g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH4.8-5.2，高溫滅菌；

4）增殖培養：剪取新長出的枝條，去頂芽后插入增殖培養基中，于23-26℃光16小時，黑8小時，培養45-60天后，莖段長出叢生芽；此階段可重復進行；所述的增殖培養基由以下組分構成：?WPM基本培養基?+?ZT?1.0-2.0?mg/L?+?NAA?0.1-0.2?mg/L?+?20g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH?4.8-5.2，高溫滅菌；

5）壯苗培養：將長到1-2cm長的叢生芽剪切移入壯苗培養基中，于23-26℃光16小時/黑8小時，培養25-35天，待長到3-5cm后移入基質中，進行瓶外生根；所述的壯苗培養基由以下組分構成：WPM基本培養基?+?ZT?0.5-1.0?mg/L?+?NAA0.05-0.1?mg/L?+?20g/L?蔗糖或白糖?+?6-10?g/L?瓊脂，pH?4.8-5.2，高溫滅菌；

6）瓶外生根：在每年10至次年3月，將長到3-5?cm高的瓶苗在室外放置1周，洗去枝條上的瓊脂后移入含有含泥炭：珍珠巖：蛭石體積比2：1：1的基質中，在保濕保溫條件下生長，1-2個月后生根。

為了實現上述的第二目的，本發明采用了以下的技術方案：?