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[發明專利]犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙及制備方法有效

專利信息
申請號: 201310323055.1 申請日: 2013-07-29
公開(公告)號: CN103399154A 公開(公告)日: 2013-11-20
發明(設計)人: 廖園園;漆世華;秦偉;劉潔;李建;謝紅玲;溫文生;朱薇;馮釗 申請(專利權)人: 武漢中博生物股份有限公司
主分類號: G01N33/577 分類號: G01N33/577
代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222 代理人: 張火春
地址: 430070 湖北省*** 國省代碼: 湖北;42
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 狂犬病毒 igg 抗體 膠體 免疫 層析 檢測 試紙 制備 方法
【說明書】:

技術領域

本發明涉及一種檢測試紙及制備方法,具體涉及一種犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙及制備方法。

背景技術

狂犬病是由狂犬病毒(Rabies?virus,RV)引起的人畜共患傳染病,其主要宿主為犬、貓等動物。典型癥狀為恐水癥,又稱:恐水病。本病極為兇險,病死率幾乎為100%。我國是狂犬病的高發國家,居世界第二位,僅次于印度。我國平均每年有1500多病例,約半數發生在廣西、湖南、貴州三省,在這三省犬攜帶RV率高達2.3%。外觀健康犬腦內帶毒率約5.88~13.13%,對人類的健康造成很大威脅。隨著經濟的發展和人民生活水平的提高,寵物犬的數量在不但增加,犬的活動區域也在不斷擴大。從寵物醫療市場得到的信息,人們迫切希望了解寵物犬接種狂犬疫苗后犬是否獲得抗體的保護,而目前狂犬病毒抗體的檢測工作因受檢測條件和費用的限制,并沒有得到廣泛的應用。

目前,國內外用于實驗動物包括犬、猴、鼠等狂犬病毒抗體檢測的方法和相應的試劑盒,有一定的研究和報道。但是現有檢測狂犬病毒抗體的方法包括ELISA方法、熒光免疫法、放射免疫法及化學發光法等都存在相應的弱點。ELISA方法雖然靈敏度高,但判讀結果需要一定的儀器設備。熒光免疫法、放射免疫法及化學發光法等均耗時長,且也需要一定的實驗儀器,另外,放射免疫法還存在放射性同位素污染的問題。而膠體金免疫層析法剛好可以避免以上幾種檢測方法的缺點。該方法是一種很成熟的實驗檢測方法,以其特異性強、成本低,操作簡便,結果可靠、可單份或成批測定、不需任何儀器等優點已被廣泛接受。現有關于狂犬病毒抗體膠體金檢測試紙的專利中一般都是1條對照線(或質控線),結果判讀是根據檢測線顏色深淺進行,不能進行抗體水平高低的判定。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足,提供一種犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙。該試紙采用膠體金標記的狂犬病毒單克隆抗體和膠體金標記的兔IgG做探針,包被羊抗犬IgG抗體、羊抗兔IgG抗體和羊抗鼠IgG抗體,結合樣品吸收區的狂犬病毒抗原進行抗狂犬病毒IgG抗體的檢測。

本發明的另一目的在于提供上述犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法。

本發明的目的通過下述技術方案實現:

一種犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙,包括樣品吸收區、金標探針區、固相化抗體區、吸水區和支撐板,樣品吸收區、金標探針區、固相化抗體區和吸水區鋪設在支撐板上并依次相互部分重疊;所述的樣品吸收區包被有狂犬病毒抗原,包被量優選為5~50μg;所述的金標探針區包被有金標探針1和金標探針2;所述的金標探針1為膠體金標記的狂犬病毒單克隆抗體,其標記量優選為每mL膠體金標記5~20μg單抗;所述的金標探針2為膠體金標記的兔IgG,其標記量優選為每mL膠體金標記1~10μg兔IgG;所述的固相化抗體區(自金標探針區至吸水區方向)依次有對照線C1、測試線T、對照線C2和對照線C3;所述的對照線C1包被有羊抗兔IgG抗體,包被量優選為0.05~0.5μg;所述的檢測線T包被有羊抗犬IgG抗體,包被量優選為0.5~5μg;所述的對照線C2包被有羊抗兔IgG抗體,包被量優選為0.5~5μg;所述的對照線C3包被有羊抗鼠IgG抗體,包被量優選為1~5μg。

所述的支撐板的材料優選為粘有一層聚氯乙烯襯膜的聚乙烯板;所述的樣品吸收區的材料優選為玻璃纖維膜;所述的金標探針區的材料優選為聚酯膜;所述的固相化抗體區的材料優選為硝酸纖維素膜;所述的吸水區的材料優選為吸水濾紙。

上述犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法,包括如下步驟:將膠體金標記的狂犬病毒單克隆抗體和膠體金標記的兔IgG分別噴涂于聚酯膜上;在硝酸纖維素膜上依次包被對照線C1(包被羊抗兔IgG抗體)、測試線T(包被羊抗犬IgG抗體)、對照線C2(包被羊抗兔IgG抗體)和對照線C3(包被羊抗鼠IgG抗體);在玻璃纖維膜上包被狂犬病毒抗原;將玻璃纖維膜、聚酯膜、硝酸纖維素膜和吸水濾紙組裝到支撐板上得到犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙。

優選的,所述的犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法包括如下步驟:

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