[發(fā)明專利]犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙及制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310323055.1
• 申請日: 2013-07-29
• 公開（公告）號: CN103399154A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖園園;漆世華;秦偉;劉潔;李建;謝紅玲;溫文生;朱薇;馮釗
• 申請（專利權(quán)）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 武漢科皓知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測試紙及制備方法，具體涉及一種犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙及制備方法。

背景技術(shù)

狂犬病是由狂犬病毒（Rabies?virus，RV）引起的人畜共患傳染病，其主要宿主為犬、貓等動物。典型癥狀為恐水癥，又稱：恐水病。本病極為兇險(xiǎn)，病死率幾乎為100%。我國是狂犬病的高發(fā)國家，居世界第二位，僅次于印度。我國平均每年有1500多病例，約半數(shù)發(fā)生在廣西、湖南、貴州三省，在這三省犬?dāng)y帶RV率高達(dá)2.3%。外觀健康犬腦內(nèi)帶毒率約5.88～13.13%，對人類的健康造成很大威脅。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人民生活水平的提高，寵物犬的數(shù)量在不但增加，犬的活動區(qū)域也在不斷擴(kuò)大。從寵物醫(yī)療市場得到的信息，人們迫切希望了解寵物犬接種狂犬疫苗后犬是否獲得抗體的保護(hù)，而目前狂犬病毒抗體的檢測工作因受檢測條件和費(fèi)用的限制，并沒有得到廣泛的應(yīng)用。

目前，國內(nèi)外用于實(shí)驗(yàn)動物包括犬、猴、鼠等狂犬病毒抗體檢測的方法和相應(yīng)的試劑盒，有一定的研究和報(bào)道。但是現(xiàn)有檢測狂犬病毒抗體的方法包括ELISA方法、熒光免疫法、放射免疫法及化學(xué)發(fā)光法等都存在相應(yīng)的弱點(diǎn)。ELISA方法雖然靈敏度高，但判讀結(jié)果需要一定的儀器設(shè)備。熒光免疫法、放射免疫法及化學(xué)發(fā)光法等均耗時(shí)長，且也需要一定的實(shí)驗(yàn)儀器，另外，放射免疫法還存在放射性同位素污染的問題。而膠體金免疫層析法剛好可以避免以上幾種檢測方法的缺點(diǎn)。該方法是一種很成熟的實(shí)驗(yàn)檢測方法，以其特異性強(qiáng)、成本低，操作簡便，結(jié)果可靠、可單份或成批測定、不需任何儀器等優(yōu)點(diǎn)已被廣泛接受。現(xiàn)有關(guān)于狂犬病毒抗體膠體金檢測試紙的專利中一般都是1條對照線（或質(zhì)控線），結(jié)果判讀是根據(jù)檢測線顏色深淺進(jìn)行，不能進(jìn)行抗體水平高低的判定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙。該試紙采用膠體金標(biāo)記的狂犬病毒單克隆抗體和膠體金標(biāo)記的兔IgG做探針，包被羊抗犬IgG抗體、羊抗兔IgG抗體和羊抗鼠IgG抗體，結(jié)合樣品吸收區(qū)的狂犬病毒抗原進(jìn)行抗狂犬病毒IgG抗體的檢測。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙，包括樣品吸收區(qū)、金標(biāo)探針區(qū)、固相化抗體區(qū)、吸水區(qū)和支撐板，樣品吸收區(qū)、金標(biāo)探針區(qū)、固相化抗體區(qū)和吸水區(qū)鋪設(shè)在支撐板上并依次相互部分重疊；所述的樣品吸收區(qū)包被有狂犬病毒抗原，包被量優(yōu)選為5～50μg；所述的金標(biāo)探針區(qū)包被有金標(biāo)探針1和金標(biāo)探針2；所述的金標(biāo)探針1為膠體金標(biāo)記的狂犬病毒單克隆抗體，其標(biāo)記量優(yōu)選為每mL膠體金標(biāo)記5～20μg單抗；所述的金標(biāo)探針2為膠體金標(biāo)記的兔IgG，其標(biāo)記量優(yōu)選為每mL膠體金標(biāo)記1～10μg兔IgG；所述的固相化抗體區(qū)（自金標(biāo)探針區(qū)至吸水區(qū)方向）依次有對照線C1、測試線T、對照線C2和對照線C3；所述的對照線C1包被有羊抗兔IgG抗體，包被量優(yōu)選為0.05～0.5μg；所述的檢測線T包被有羊抗犬IgG抗體，包被量優(yōu)選為0.5～5μg；所述的對照線C2包被有羊抗兔IgG抗體，包被量優(yōu)選為0.5～5μg；所述的對照線C3包被有羊抗鼠IgG抗體，包被量優(yōu)選為1～5μg。

所述的支撐板的材料優(yōu)選為粘有一層聚氯乙烯襯膜的聚乙烯板；所述的樣品吸收區(qū)的材料優(yōu)選為玻璃纖維膜；所述的金標(biāo)探針區(qū)的材料優(yōu)選為聚酯膜；所述的固相化抗體區(qū)的材料優(yōu)選為硝酸纖維素膜；所述的吸水區(qū)的材料優(yōu)選為吸水濾紙。

上述犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法，包括如下步驟：將膠體金標(biāo)記的狂犬病毒單克隆抗體和膠體金標(biāo)記的兔IgG分別噴涂于聚酯膜上；在硝酸纖維素膜上依次包被對照線C1（包被羊抗兔IgG抗體）、測試線T（包被羊抗犬IgG抗體）、對照線C2（包被羊抗兔IgG抗體）和對照線C3（包被羊抗鼠IgG抗體）；在玻璃纖維膜上包被狂犬病毒抗原；將玻璃纖維膜、聚酯膜、硝酸纖維素膜和吸水濾紙組裝到支撐板上得到犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙。

優(yōu)選的，所述的犬抗狂犬病毒IgG抗體膠體金免疫層析檢測試紙的制備方法包括如下步驟：