[發(fā)明專利]PcDNA3.1(+)-Fbw7重組質(zhì)粒及其構(gòu)建方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310319435.8
• 申請(qǐng)日: 2013-07-26
• 公開（公告）號(hào): CN103352051A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文崗;谷樂;郭躍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)附屬成功醫(yī)院;廈門大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/66;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙) 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種重組質(zhì)粒，尤其是涉及PcDNA3.1(+)-Fbw7重組質(zhì)粒及其構(gòu)建方法與在制備治療人膽管癌藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

FBW7（F-box?and?WD?repeat?domain-containing7）最早發(fā)現(xiàn)于大腸桿菌中，最初命名為Cdc4，又稱FBXW7、SEL-10、hAgo、hCDC4，是SCF(SKP1/CUL1/F-box)復(fù)合物型泛素連接酶，常參與底物的泛素化。

所謂泛素化是指將底物蛋白轉(zhuǎn)變成為泛素的化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致底物功能喪失并降解。泛素化具有重要的生命意義，近年來，從泛素化的角度研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展成為腫瘤研究的重要部分(1.Philip?Cohen?and?Marianna?Tcherpakov.Will?the?Ubiquitin?System?Furnish?as?Many?Drug?Targets?as?Protein?Kinases?Cell.2010.143:686-693)。通過泛素連接酶了解泛素化是該研究的重要部分。FBW7在大腸桿菌分裂中發(fā)揮作用。

其他研究證實(shí)，F(xiàn)BW7還可調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)胞生長、分化等，F(xiàn)BW7突變或功能缺失會(huì)引起染色體不穩(wěn)定及細(xì)胞的病變，甚至癌變。文獻(xiàn)報(bào)道，在膽管癌中FBW7突變率是最高的，達(dá)到35%(2.Shahab?Akhoondi,Dahui?Sun,Natalie?von?der?Lehr,et?al.FBXW7/hCDC4is?a?General?Tumor?Suppressor?in?Human?Cancer.Cancer?Res.2007.67(19):9006-12)，在T型急性淋巴細(xì)胞白血病、乳腺癌、結(jié)腸癌、子宮內(nèi)膜、胰腺癌、和胃癌中的突變率均大于6%。在小鼠中FBW7+/-雜合體比FBW7+/+純合體有更高的致瘤率(3.Welcker?M，Clurman?BE.Ubiquitin?ligase：a?tumour?suppressor?at?the?crossroads?of?cell?division，growth?and?differentiation.Nat?Rev?Cancer.2008.8:83-93)。

由此可見，F(xiàn)BW7突變和腫瘤關(guān)系密切。FBW7作用底物很廣泛，有的是原癌基因，有的是細(xì)胞周期蛋白，很多都和腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有密切關(guān)系。

現(xiàn)已有文獻(xiàn)證實(shí)，在細(xì)胞水平FBW7的高表達(dá)將會(huì)直接導(dǎo)致癌細(xì)胞生長的不正常、甚至凋亡，證明了FBW7就是抑癌基因(4.Crusio?KM,King?B,Reavie?LB,Aifantis?I.The?ubiquitous?natureof?cancer:the?role?of?the?SCF(Fbw7)complex?in?development?and?transformation.Oncogene.2010.29:4865–73)。

此外FBW7的缺失會(huì)促進(jìn)腫瘤的抗藥性(5.Zhiwei?Wang,Hidefumi?Fukushima,Daming?Gao,Hiroyuki?Inuzuka,Lixin?Wan,Alan?W.Lau,Pengda?Liu?and?Wenyi?Wei.The?two?faces?of?FBW7in?cancer?drug?resistance.Bioessays.2011.33:851–859)。在乳腺癌中，F(xiàn)BW7和mTOR的關(guān)系已有報(bào)道，敲除FBW7將會(huì)導(dǎo)致mTOR表達(dá)量的上升(6.Jian-Hua?Mao,et?al.FBXW7Targets?mTOR?for?Degradation?and?Cooperates?with?PTEN?in?Tumor?Suppression.Science.2008.321:1499-1502)。此外，在乳腺癌中C/EBPδ可以抑制FBW7的表達(dá)，從而增強(qiáng)mTOR/AKT/HIF-1信號(hào)通路的活性，利于乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展；FBW7和NOTCH1信號(hào)通路在乳腺癌中也具有重要的關(guān)系，F(xiàn)BW7的缺失使得NOTCH1信號(hào)加強(qiáng)，進(jìn)一步導(dǎo)致NOTCH1依賴性的MYC調(diào)節(jié)失敗，和AKT高表達(dá)。MYC在乳腺癌中也受到FBW7直接泛素化的調(diào)節(jié)，所以乳腺癌中NOTCH1/AKT/mTOR信號(hào)通路都和FBW7具有密切的關(guān)系(7.Jinhua?Xu,Yinghua?Chen,and?Olufunmilayo?I.Olopade.MYC?and?Breast?Cancer.Genes&Cancer.2010.1(6):629-640)。