[發明專利]雞IBV S1蛋白的CD8+T細胞抗原表位多肽

有效

• 申請號: 201310317878.3
• 申請日: 2013-07-25
• 公開（公告）號: CN103387604A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 丁鏟;譚磊;仇旭升;宋翠萍;孫英杰;于圣青;范瑾
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;G01N33/68;A61K39/215;A61P31/14;C12N15/50
• 代理公司: 上海百一領御專利代理事務所(普通合伙) 31243
• 代理人: 馬育麟

技術領域

本發明屬于基因工程和蛋白質工程領域，具體涉及雞IBV?S1蛋白的CD8+T細胞抗原表位多肽。?

背景技術

雞傳染性支氣管炎(Avian?Infectious?Bronchitis，IB)是國際獸疫局（OIE）及我國規定的家禽B/二類傳染病之一。該病是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious?Bronchitis?Virus,IBV）引起的一種急性、高度傳染性并具有重大經濟意義的病毒病。發生于所有養禽國家，且病原存在多個臨床表型，包括腎型、呼吸型和腺胃型等，并且常與新城疫（AIV）、禽流感（AIV）等病毒造成混合感染，給該病的防控帶來較大困難。目前我國養雞場這3種亞型IBV均有發現。?

市場上使用的IBV疫苗主要是活病毒疫苗和滅活病毒油佐劑疫苗，活病毒疫苗主要用于雛雞的早期的保護或者是初次免疫使用，滅活疫苗一般用于加強免疫使用。由于IBV病毒十分容易失活，經常導致田間實驗因疫苗的效力不足而失敗。且常規疫苗僅能保護單一亞型IBV，無法產生交叉免疫保護作用。因此，研制能夠保護多亞型IBV通用疫苗十分迫切且必要。通用疫苗構建策略主要是以功能性細胞表位為基礎，將串聯的功能性表位選擇性偶聯抗原嵌入適合載體，如核酸疫苗載體，病毒載體，重組釀酒酵母等進行免疫以獲得交叉保護效力。其中T細胞表位主要能夠激活CD8+T淋巴細胞產生保護性CTL免疫應答，可以對病毒多亞型產生交叉免疫保護作用，因此篩選功能性T細胞表位對于研究通用疫苗的意義就更為重要了。?

IBV屬于冠狀病毒科，是冠狀病毒的代表株。S蛋白是構成冠狀病毒最表層纖突的主要成分，由S1和S2兩部分構成，IBV主要的細胞表位存在S1蛋白中，S1蛋白是決定IBV血清特異性抗原決定簇的主要蛋白。由于IBV血清型眾多，S1是IBV變異程度最大的基因，不同毒株S1基因核苷酸變化?幅度可高達50%以上，在同一血清毒株的S1基因中有25%-50%的氨基酸差異。這些差異導致各毒株之間交叉免疫保護性弱，因此局限于某一特定亞型的IBV疫苗可能無法提供完全保護，而使用多種IBV亞型制備二聯苗或多聯苗因多種抗原出現自身抗原交叉反應干擾效果并不理想。隨著對病原體抗原表位的深入研究，基于表位為基礎的疫苗開始顯示出良好的應用前景。根據抗原受體結合的細胞不同，分為T細胞表位和B細胞表位，T細胞表位主要通過在抗原提呈細胞（APC）中與MHC分子結合后提呈于細胞表面與TCR結合后激活T細胞免疫應答。MHC?I類分子主要結合8-10個氨基酸的多肽，而MHC?II類分子主要結合12-25個氨基酸多肽，B細胞表位在結構上與T細胞明顯不同，主要以非連續的構像表位為主（90%以上），空間構像鄰近但氨基酸并不連續且無MHC限制性，B細胞表位結合BCR激活B淋巴細胞分泌抗體發揮抗病毒作用。通過對潛在抗原表位進行篩選，選擇具有保護性抗原表位，以此為基礎構建的單價或多價疫苗，是提高疫苗免疫保護效果的一種確實方法。篩選出的功能表位疫苗不但能夠避免抑制性表位誘導的免疫抑制作用，還可以使保護性表位誘導的免疫反應處于主導地位。?

目前IBV的表位研究中，主要報道了其B細胞抗原表位。有研究表明，大多數IBV的B細胞抗原表位位于S1蛋白的N端，不同毒株S蛋白的氨基酸差異也都集中在S1的3個區域上，分別是：N端第37-83氨基酸處，內含有兩個親水區；第117-160氨基酸處，為疏水區；第269-298氨基酸處，為強親水區。推斷這些區域都可能是S1蛋白上抗原表位，其次氨基酸第294-316位，第532-537位以及第566-548位對保護也可能有作用。與B細胞表位不同，雞的T細胞表位受到嚴格的種屬MHC限制，主要與雞的B-F2單倍型結合基序關系緊密。目前對于IBV的T細胞表位研究還很少，對于開展IBV通用表位疫苗研究造成了很大影響，因此本發明重點對IBV?S1蛋白的CD8+T細胞表位進行篩選。?