[發明專利]雞IBV S1蛋白的CD8+T細胞抗原表位多肽

有效

• 申請號: 201310317878.3
• 申請日: 2013-07-25
• 公開（公告）號: CN103387604A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 丁鏟;譚磊;仇旭升;宋翠萍;孫英杰;于圣青;范瑾
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;G01N33/68;A61K39/215;A61P31/14;C12N15/50
• 代理公司: 上海百一領御專利代理事務所(普通合伙) 31243
• 代理人: 馬育麟

1.雞IBV?S1蛋白的CD8+T細胞抗原表位多肽，其特征在于，其氨基酸序列與雞B-F2單倍型MHC?I類分子的結合基序相符合。

2.如權利要求1所述的抗原表位多肽，其特征在于，

氨基酸序列符合雞B-F2*12單倍型MHC?I類分子結合基序，其氨基酸序列為GAYAVVNV；或，

氨基酸序列符合雞B-F2*19單倍型MHC?I類分子結合基序，其氨基酸序列分別為SRIQTATQP、SRIQTATDP或SRNATGSQP。

3.如權利要求1或2所述的抗原表位多肽在制備IBV通用疫苗或IBV診斷試劑盒中的應用。

4.編碼權利要求2所述抗原表位多肽的基因。

5.一種用于制備IBV通用疫苗的CD8+T細胞抗原表位多肽組合，其特征在于，共四條多肽，其氨基酸序列分別為GAYAVVNV、SRIQTATQP、SRIQTATDP、SRNATGSQP。

6.一種表達盒，其特征在于，含有四條多肽，其氨基酸序列分別為GAYAVVNV、SRIQTATQP、SRIQTATDP、SRNATGSQP。

7.一種IBV通用疫苗，其特征在于，含有氨基酸序列為GAYAVVNV、SRIQTATQP、SRIQTATDP和SRNATGSQP的多肽。

8.一種篩選雞IBV?S1蛋白的CD8+T細胞抗原表位的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）根據雞B-F2單倍型MHC?I類分子的結合基序，在雞IBV?S1蛋白的氨基酸序列中篩選與雞B-F2單倍型結合基序相符合的表位多肽；

（2）構建多亞型的IBV?S1蛋白真核表達質粒，并將該質粒免疫SPF雞；

（3）分別取不同真核質粒免疫后SPF雞的脾淋巴細胞，采用ELIspot法測定步驟（1）中篩選的多肽誘導雞脾淋巴細胞分泌IFN-γ的能力，利用ELIspot讀板機獲取斑點數據，能顯著誘導雞脾淋巴細胞分泌IFN-γ的多肽即為雞IBV?S1蛋白功能性CD8+T細胞抗原表位。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述的多亞型IBVS1蛋白真核表達質粒分別為pVAX-S1-M41、pVAX-S1-T、pVAX-S1-QX。

10.如權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟（3）的ELIspot法是將雞IFN-γ包被ELISPOT板，加入分離的脾淋巴細胞及步驟（1）的多肽培養24h后，順次加入生物素標記的雞IFN-γ檢測抗體，鏈霉親和素堿性磷酸酶，然后加入BCIP/NBT顯色液，顯色后進行讀數。