[發明專利]一種丙型肝炎病毒吸附劑及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201310316558.6
• 申請日: 2013-07-25
• 公開（公告）號: CN103394331A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 王業富;森林;韓振偉;張磊;嚴玲
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: B01J20/24
• 分類號: B01J20/24;B01J20/30;A61K47/42;A61K31/7088;A61P31/14
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

技術領域

本發明屬于醫療生物材料領域，具體涉及一種丙型肝炎病毒吸附劑及其制備方法與應用。

背景技術

丙型肝炎由丙肝病毒（HCV）引起，分布極廣，容易演變為慢性肝炎、肝硬化和肝癌。除極少數急性丙型肝炎可以治愈外，絕大多數患者一旦染病終身帶病。目前尚無完全有效的治療方案，臨床上也無疫苗；唯一公認有效的治療手段僅有干擾素，而且必須在感染的早期實施，否則無明顯的效果。

血液中的病毒是丙型肝炎的致病因子。雖然已經有了早期的探索，但仍未定論的是如何特異、有效地從血液中清除這些病毒，而又不造成對機體的損害。親和吸附治療是血液凈化的一種重要方法，其原理是將某一種或幾種配基固定在穩定無熱源的載體上構建成親和吸附柱，通過體外循環的方式清除患者血液中的致病因子，凈化血液，打破免疫平衡，改善體內微環境，使免疫系統處于優勢，從而輔助其他治療手段的實施。當前臨床上應用血液凈化療法能夠通過特異性地清除機體的自身抗體，治療自身免疫性疾病、器官移植排斥反應，還有報道通過吸附低密度脂蛋白治療高膽固醇血癥等。然而，利用指數富集的配基系統進化技術（Systematic?Evolution?of?Ligands?by?Exponential?Enrichment，SELEX）篩選出來的適配子吸附血漿中的丙肝病毒還未見報道。

常見的適配子分子包括單鏈DNA與單鏈RNA，是一類有特殊空間結構的核糖核酸，這些結構賦予它們同靶分子高效物理接合的能力，二者間形成特異緊密的“鎖－鑰”結構。此項技術發端于探索早期生命形態的研究，現已廣泛應用在靶向藥物、高效快速檢測等諸多方面。通過隨機合成的單鏈核糖核酸與靶分子的多輪結合與沖洗，篩選出與靶分子最具接合效率的核糖核酸序列。當前已出現多種成熟的合成方法，易于對其進行工業化生產，例如：微球磁珠法、不對稱PCR等。近來的實踐表明，這類分子能夠高效、快速、特異的俘獲靶分子，為特異性清除血液中的病毒提供了有效的工具。

發明內容

本發明的首要目的在于提供一種無毒、無害、無免疫源性、丙肝包膜蛋白吸附效率高并且安全性能良好的丙型肝炎病毒吸附劑，其能特異性清除血漿中丙型肝炎病毒顆粒。

本發明的另一目的在于提供上述丙型肝炎病毒吸附劑的制備方法。

本發明的再一目的在于提供上述丙型肝炎病毒吸附劑的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種丙型肝炎病毒吸附劑，包含載體及連接在載體上的結合丙型肝炎病毒包膜蛋白的單鏈脫氧核糖核酸配基；所述的連接優選為通過化學偶聯的方式固定；其具有如下結構：

其中：代表載體，Linker代表活化偶聯手臂基團，anti-HCVaptamer代表特異性結合丙型肝炎病毒包膜蛋白的單鏈脫氧核糖核酸配基。

所述的載體優選為玻璃、瓊脂糖、殼聚糖等具有光滑表面及活化基團的材料微球，微球直徑應處于45μm至165μm之間。玻璃是常被用于固定DNA的一種安全材料，制作工藝成熟而且簡單，質量可控制性強，容易獲得尺寸均一的玻璃微球；其表面光滑，血液相容性好，已在相關產品中作為支持載體使用。此外，瓊脂糖、殼聚糖及陶瓷等具有光滑表面及活化基團的材料，均能作為支持載體。

所述的結合丙型肝炎病毒包膜蛋白的單鏈脫氧核糖核酸配基優選為在結合丙肝病毒的適配子序列（該序列為公開文獻Chen?F,Hu?Y,Li?D,Chen?H,Zhang?X-L(2009)CS-SELEX?Generates?High-Affinity?ssDNA?Aptamers?as?Molecular?Probes?for?Hepatitis?C?Virus?Envelope?Glycoprotein?E2.PLoS?ONE4(12):e8142中對丙型肝炎病毒包膜蛋白E2有高效接合能力的單鏈DNA適配子的核苷酸序列）的5’和3’端分別添加長度為10～25nt的支持手臂的核苷酸鏈。支持手臂的作用有兩點：1）作為適配子自身序列與微球的延伸，保護適配子折疊時所需要的空間位阻；2）可以同時作為原位PCR合成時固定在球珠上的引物序列，簡化適配子球珠的生產工藝。

其中，結合丙肝病毒的適配子序列（SEQ?ID?NO.1）如下所示：