[發(fā)明專利]含有一個或幾個點(diǎn)突變的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310315499.0
• 申請日: 2013-07-26
• 公開（公告）號: CN104342416B
• 公開（公告）日: 2020-01-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李鶴;余允東;祝俊;吳會廣;黃學(xué)川;辛有英;任麗梅;成志遠(yuǎn);王翠;杜會云
• 申請（專利權(quán)）人: 石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/81;C12N1/19;C12P17/06;C12R1/84
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1.一種洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，所述突變體與SEQ ID NO.1的野生型土曲霉(A.terreus)酰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列相比，存在S145N突變，同時存在選自N45R、A110P、Q230M、L293M、L379M中的任意1至5個氨基酸突變。

2.如權(quán)利要求1所述的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，所述突變體與SEQ IDNO.1的野生型土曲霉(A.terreus)酰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列相比，存在N45R、S145N氨基酸突變，以及存在選自A110P、Q230M、L293M、L379M中的任意1至4個氨基酸突變。

3.如權(quán)利要求1所述的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，所述突變體與SEQ IDNO.1的野生型土曲霉(A.terreus)酰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列相比，存在S145N、L293M氨基酸突變，以及存在選自N45R、A110P、Q230M、L379M中的任意1至4個氨基酸突變。

4.如權(quán)利要求1所述的突變體洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，所述突變體與SEQ ID NO.1的野生型土曲霉(A.terreus)酰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列相比，存在N45R、S145N、L293M氨基酸突變，以及存在選自A110P、Q230M、L379M中的任意1至3個氨基酸突變。

5.如權(quán)利要求1所述的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體，其特征在于，所述突變體與SEQ IDNO.1的野生型土曲霉(A.terreus)酰基轉(zhuǎn)移酶氨基酸序列相比，存在N45R、A110P、S145N、L293M氨基酸突變，以及存在選自Q230M、L379M中的任意1至2個氨基酸突變。

6.一種編碼權(quán)利要求1～5任一項所述的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體的核酸。

7.一種包含權(quán)利要求6所述的核酸的表達(dá)載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7的表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體為真核細(xì)胞表達(dá)載體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8的表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體為pPIC 9K表達(dá)載體。

10.一種包含權(quán)利要求7-9任一項所述的表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為酵母細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為巴斯德畢赤酵母(Pichia pastoris)。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞為巴斯德畢赤酵母GS115。

15.權(quán)利要求1～5任一項所述的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體用于催化莫那可林酸和α-二甲基丁酰基-S-丙酸甲酯反應(yīng)合成辛伐他汀酸的用途。

16.一種合成辛伐他汀的方法，其特征在于，采用權(quán)利要求1～5任一項所述的洛伐他汀酰基轉(zhuǎn)移酶突變體催化莫那可林酸和α-二甲基丁酰基-S-丙酸甲酯反應(yīng)合成辛伐他汀酸。