[發(fā)明專利]一種抗鴨病毒性肝炎組合物、凍干粉、制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310315435.0
• 申請日: 2013-07-24
• 公開（公告）號: CN104162161A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳紅云;趙小中;郭俊清
• 申請（專利權(quán)）人: 河南聯(lián)合英偉飼料有限公司
• 主分類號: A61K39/42
• 分類號: A61K39/42;A61K9/19;A23K1/16;A61P1/16;A61P31/12;A61K38/00
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種抗鴨病毒性肝炎組合物，以及抗鴨病毒性肝炎凍干粉，同時還涉及該凍干粉的制備方法及應(yīng)用，屬于獸用飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鴨在我國養(yǎng)殖業(yè)中占有較大份額，每年出欄量將近20億只，產(chǎn)肉量達(dá)到近300萬噸，年利潤達(dá)30多個億。但是，鴨病肆虐為我國養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大損失，其中，鴨病毒性肝炎，是危害雛鴨最嚴(yán)重的疫病之一。

鴨病毒性肝炎簡稱鴨肝炎，主要危害20日齡以內(nèi)的雛鴨，雛鴨日齡越小，死亡率越高，最高死亡率可達(dá)90～95%，并且所有的抗菌素對本病無效。早在1958年鴨病毒性肝炎在我國出現(xiàn)，20世紀(jì)80年代初期起本病在我國再次流行，1997年以來，鴨病毒性肝炎在某些地區(qū)出現(xiàn)較嚴(yán)重的流行，其疫情不能被標(biāo)準(zhǔn)鴨病毒性肝炎I型弱毒疫苗完全地控制，懷疑有I型鴨病毒性肝炎病毒變異株出現(xiàn)。

目前，人們通過疫苗類對抗鴨病毒性肝炎病進(jìn)行免疫，早期效果較好，但是需要多次接種，操作麻煩，成本較高，容易使畜禽產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，且疫苗對于保藏條件要求較為苛刻，需在低溫下冷藏，室溫條件下一段時間則失效。因此，迫切需要一種能夠防治鴨病毒性肝炎的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種抗鴨病毒性肝炎組合物。

同時，本發(fā)明還提供一種抗鴨病毒性肝炎凍干粉。

再者，本發(fā)明還提供一種抗鴨病毒性肝炎凍干粉的制備方法。

最后，本發(fā)明還提供一種抗鴨病毒性肝炎凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用。

為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種抗鴨病毒性肝炎組合物，由以下重量份的組分組成：抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體92～97份，抗鴨病毒性肝炎轉(zhuǎn)移因子1～3份。

一種抗鴨病毒性肝炎凍干粉，由以下重量份的組分組成：抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體95～97份，抗鴨病毒性肝炎轉(zhuǎn)移因子1～2份，滅活劑0.2～0.3份，防腐劑0.01～0.02份，耐熱凍干保護(hù)劑2.05～3.6份。

所述的滅活劑為甲醛。

所述的防腐劑為硫柳汞。

優(yōu)選的，所述的耐熱凍干保護(hù)劑由以下重量份的組分組成：硒0.05～0.1份，維生素C0.5～1份，聚乙烯吡咯烷酮1～2份，甘氨酸0.5份。

一種抗鴨病毒性肝炎凍干粉的制備方法，具體步驟如下：

（1）分離毒株制備疫苗：取鴨病毒性肝炎病毒株增殖、滅活后制得疫苗備用；

（2）免疫健康雞群制備高免蛋：取步驟（1）制備的疫苗免疫接種健康雞群，當(dāng)抗體效價達(dá)到1:256時，收集高免蛋清理、消毒后晾干備用；

（3）酸化處理：取步驟（2）制備的高免蛋分離卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢柚令伾l(fā)白得卵黃溶液，在卵黃溶液中加入pH值為4.9～5.2的預(yù)冷酸化水，加入量為卵黃溶液體積的8倍，混勻后室溫下靜置沉淀；

（4）取步驟（3）靜置后的上清液，按體積加入0.8%的NaCl和NaSO₄混合物，以提高抗體的解離度，離心得含有抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體的上清液；

（5）取步驟（4）中的上清液，上清液中抗鴨病毒性肝炎卵黃抗體的量為95～97份，再在上清液中加入1～2份的抗鴨病毒性肝炎轉(zhuǎn)移因子，混勻后依次用0.45μm和0.22μm的濾膜過濾；

（6）將步驟（5）的濾液濃縮得濃縮液，在濃縮液中依次加入0.2～0.3份的滅活劑、0.01～0.02份的防腐劑及2.05～3.6份的耐熱凍干保護(hù)劑，混勻后經(jīng)預(yù)凍、凍干處理即得抗鴨病毒性肝炎凍干粉。

所述步驟（2）中第一次使用滅活疫苗正常量，為10^3.2ELD₅₀/0.1ml鴨病毒性肝炎病毒滅活疫苗1.5mL，間隔7天免疫1次，后續(xù)每次免疫增加1倍量，于第二次免疫后開始檢測抗體效價。

所述步驟（4）中NaCl與NaSO₄的質(zhì)量比為4:1。

所述步驟（5）中抗鴨病毒性肝炎轉(zhuǎn)移因子可以為市售商品，也可以采用以下方法制備得到：

（1）用滅菌后的生理鹽水清洗用鴨病毒性肝炎抗原免疫過的豬脾臟，去其表面筋、脂肪等組織，再用生理鹽水沖洗；

（2）將步驟（1）處理后的豬脾臟破碎，加入2倍預(yù)冷的PBS緩沖液，用組織勻漿儀將其勻質(zhì)得勻漿液；

（3）將步驟（2）中的勻漿液用超聲破碎儀處理10min得破碎液；

（4）將步驟（3）的破碎液調(diào)至pH值為5.3～5.7，6000rpm離心30min，收集上清液；