[發(fā)明專利]一株人源具有抗氧化功能干酪乳桿菌grx12及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310312784.7
• 申請(qǐng)日: 2013-07-23
• 公開（公告）號(hào): CN103343107A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 顧瑞霞;劉東;黃玉軍;陳霞;陳大衛(wèi);郭飛翔
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A23C9/123;A23C9/127;A23L1/29;A61K35/74;A61P39/06;C12R1/245
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及具有抗氧化功能干酪乳桿菌grx12菌株及該菌株在抗氧化產(chǎn)品方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)

生物氧化是機(jī)體新陳代謝的重要生理過程，但此過程中會(huì)產(chǎn)生自由基等各種活性氧分子(ROS)。盡管正常情況下，機(jī)體存在著自由基清除系統(tǒng)，但如果機(jī)體受到某些因素影響，自由基清除系統(tǒng)出現(xiàn)故障導(dǎo)致體內(nèi)自由基過度產(chǎn)生，則會(huì)作用于機(jī)體內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸等分子，造成細(xì)胞損傷，給機(jī)體健康帶來很大威脅，導(dǎo)致如癌癥、白內(nèi)障、肝硬化、動(dòng)脈粥樣硬化等惡性疾病。通過膳食中補(bǔ)充抗氧化物質(zhì)可以增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力，但許多化學(xué)合成的抗氧化物存在安全問題，此外，從膳食中補(bǔ)充的抗氧化劑因其在吸收的過程中易被消化分解成為其他不具備抗氧化能力的物質(zhì)，或是不易被機(jī)體吸收而直接排出體外。因此，開發(fā)具有高抗氧化活性且安全的健康膳食補(bǔ)充劑成為一個(gè)很有意義的研究課題。

乳酸菌(Lactic?Acid?Bacteria，LAB)作為腸道常駐菌群，可以直接在機(jī)體氧化損傷的重點(diǎn)部位——腸道發(fā)揮抗氧化作用，維持腸道處于氧化還原平衡狀態(tài)。并且乳酸菌在腸道定植后還能不斷增殖，產(chǎn)生更多能夠發(fā)揮抗氧化作用的乳酸菌，源源不斷地在腸道扮演ROS清道夫的角色。此外，大量的研究已充分驗(yàn)證乳酸菌的安全性。因此乳酸菌的抗氧化作用與傳統(tǒng)的抗氧化劑相比有更多的優(yōu)勢(shì)，篩選具有良好抗氧化能力的乳酸菌也已成為當(dāng)前益生菌的熱門研究課題。

理想的益生菌制劑的菌株，應(yīng)具有以下幾個(gè)屬性：（1）來源（最好來源于人體）；（2）安全性；（3）在載體（如食物）中的活力和活性；（4）胃酸和膽汁的抗性；（5）在消化道中存留能力；（6）抗菌物質(zhì)的產(chǎn)生等。

目前篩選高抗氧化活性乳酸菌的研究所用菌株大多從發(fā)酵食物或動(dòng)物腸道中分離獲得，對(duì)長壽人群腸道的乳酸菌抗氧化活性研究報(bào)道則較少。而益生菌的一個(gè)重要屬性是最好來源于人體本身。

本發(fā)明人針對(duì)上述課題，以江蘇如皋長壽村人群腸道乳酸菌為目標(biāo)菌群，經(jīng)體外抗氧化試驗(yàn)篩選出具有較好抗氧化活性的益生菌，并研究了其對(duì)人工胃液、人工腸液及膽鹽的耐受能力以進(jìn)一步驗(yàn)證其在腸道中的存活能力。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一株益生菌株。

本發(fā)明的菌株是干酪乳桿菌grx12，保藏號(hào)為CGMCC?No：7696。所述干酪乳桿菌grx12是從江蘇如皋長壽村人群腸道中分離的具有顯著抗氧化能力且對(duì)人工胃液、人工腸液和膽鹽具有較好耐受能力的益生菌菌株。

本發(fā)明的還公開了所述干酪乳桿菌在制備具有抗氧化作用方面的功能性食品或藥品中的應(yīng)用，特別是在制備發(fā)酵乳制品中提高發(fā)酵乳的抗氧化作用的應(yīng)用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明干酪乳桿菌grx12的菌落特征圖；

圖2為本發(fā)明干酪乳桿菌grx12的菌體特征圖；

圖3為本發(fā)明干酪乳桿菌grx12的生長曲線圖；

圖4為本發(fā)明干酪乳桿菌grx12的16S?rDNA序列PCR擴(kuò)增結(jié)果圖。

本發(fā)明的菌株grx12已于2013年6月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院，中國科學(xué)院微生物研究所），保藏號(hào)為CGMCC?No：7696，分類命名：干酪乳桿菌Lactobacillus?casei。

具體實(shí)施方式

1．樣品的采集

樣品為：新鮮、一星期內(nèi)未服用抗生素的江蘇如皋長壽村人群的黃軟大便。用滅菌竹簽挑取糞便內(nèi)部中心糞便樣品放入運(yùn)輸培養(yǎng)基中，再加入1mL滅菌液體石蠟密封后，迅速置于冰盒內(nèi)，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物菌群分析。

2.乳桿菌的分離與純化

在無菌操作臺(tái)上用無菌樣品稀釋液將采集的樣品稀釋至相應(yīng)稀釋度后從試管中取0.5mL稀釋液，接種于改良MRS培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)皿中，置于厭氧罐中于37℃培養(yǎng)48h。觀察并記錄菌落形態(tài)和革蘭氏染色菌體形態(tài)特征，并同時(shí)進(jìn)行過氧化氫酶試驗(yàn)。將革蘭氏染色陽性、過氧化氫酶試驗(yàn)陰性的桿菌暫定為乳桿菌并進(jìn)一步進(jìn)行平板劃線純化，共獲取75株乳桿菌，加脫脂乳作為保護(hù)劑進(jìn)行真空冷凍干燥后，置于-80℃保藏。

3.乳桿菌消化道逆環(huán)境耐受能力試驗(yàn)