[發明專利]一種雙功能抗體、其構建方法及雙功能抗體基因工程藥物

在審

• 申請號: 201310312220.3
• 申請日: 2013-07-23
• 公開（公告）號: CN104342452A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 易俊波;周兆平;蘇慶寧;買制剛;章剛;王玉樹;雷明軍;林楓
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C07K19/00
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 汪麗

技術領域

本發明屬于生物制藥技術領域，并涉及一種重組抗體。更具體地，本發明涉及一種包括兩種目的蛋白的雙功能抗體、其構建方法、以及含有該雙功能抗體的基因工程藥物。

背景技術

天然存在的抗體分子具有相似的結構，即均具有由兩條相同的重鏈和兩條相同的輕鏈所組成的對稱結構?；谠搶ΨQ結構，可以設計得到類似于天然抗體結構的重組抗體，即保留重鏈和輕鏈的保守恒定區結構，而將可變區替換成目標抗體的分子。此時，與重鏈的可變區和和輕鏈的可變區相連接的兩種不同基因既具有抗體識別的特異性，又能起到不同抗體雙重功能的作用。雖然目前已經提出了設計上述重組抗體的概念，但現有技術中尚未建立完善的構建該重組抗體的方法。

發明內容

本發明希望解決的技術問題在于，針對現有技術中尚未建立完善的雙功能重組抗體的構建方法，提供一種易于實現且針對特定目標抗原的雙功能抗體的構建方法。另外，本發明也提供采用上述方法得到的雙功能抗體及包含該抗體的基因工程藥物。

本發明希望解決的技術問題通過以下技術方案得以實現：提供一種雙功能抗體的構建方法，該方法包括以下步驟：

A：分別獲取抗體的重鏈恒定區基因、抗體的輕鏈恒定區基因、第一目的基因和第二目的基因；

B：采用表達載體構建包括所述抗體的重鏈恒定區基因、所述抗體的輕鏈恒定區基因、所述第一目的基因和所述第二目的基因的重組載體穿梭質粒；

C：將步驟B中形成的重組載體穿梭質粒轉染至表達細胞株中進行培養，表達得到所述雙功能抗體。

在上述雙功能抗體的構建方法中，在所述步驟A中，根據目標抗原決定簇獲取所述第一目的基因和所述第二目的基因。

在上述雙功能抗體的構建方法中，所述步驟A包括：

設計所述抗體的重鏈恒定區基因的引物、所述抗體的輕鏈恒定區基因的引物、所述第一目的基因的引物和所述第二目的基因的引物；

引物1：5’-CCC?AAG?CTT?CCA?AAA?CGA?CAC?CCC?CAT?CTG-3’；

引物2：5’-AAA?AGG?GAC?TCC?CCG?GTT?CAT?CTA?GGG?CGC?TTG?CCCAAT?CAT-3’；

引物3：5’-GTC?GCG?GCC?GC?ACT?GTG?GCT?GCA?CCA?TCT?GTC-3’；

引物4：5’-GAA?GAG?AAA?TAA?ATA?AAC?AAT?CAT?ACA?CTC?TCC?CCTTTT?GAA?GCT-3’；

引物5：5’-ATG?ATT?GGG?CAA?GCG?CCC?TAG?ATG?AAC?CGG?GGAGTC?CCT?TTT-3’；

引物6：5’-AGA?GGA?TCC?CCA?GGT?GCC?ACT?ATC?CTG?GAG-3’；

引物7：5’-TTC?AAA?AGG?GGA?GAG?TGT?ATG?ATT?GTT?TAT?TTT?CTCTTC-3’；

引物8：5’-GAA?GGTACC?CAA?GCC?CAC?AGA?TAT?TTCCTG-3’；

基于PCR方法，使用引物1和引物2擴增出所述抗體的重鏈恒定區基因，使用引物3和引物4擴增出所述抗體的輕鏈恒定區基因，使用引物5和引物6擴增出所述第一目的基因，以及使用引物7和引物8擴增出所述第二目的基因。

在上述雙功能抗體的構建方法中，在步驟B中，所述表達載體是pCDNA3.1/His?C、pCDNA5/FRT/TO?TOPO?TA、pEGFP-N1或pBudce4.1。

在上述雙功能抗體的構建方法中，在步驟C中，所述表達細胞株為293細胞、AD293細胞或中國倉鼠卵巢細胞。

在上述雙功能抗體的構建方法中，所述構建方法還包括離心收集上清或細胞，對所述雙功能抗體進行純化。

根據本發明的另一方面，提供一種雙功能抗體，其包括抗體的重鏈恒定區和抗體的輕鏈恒定區，所述雙功能抗體還包括分別與所述抗體的重鏈恒定區和所述抗體的輕鏈恒定區相連接的第一目的蛋白和第二目的蛋白。

在上述雙功能抗體中，所述抗體的重鏈恒定區還包括激活免疫功能的抗體Fc片段。

在上述雙功能抗體中，所述第一目的蛋白為CD4，第二目的蛋白為CCR5。

根據本發明的另一方面，提供一種雙功能抗體基因工程藥物，該雙功能基因工程藥物含有上述雙功能抗體。