[發明專利]一種雙功能抗體、其構建方法及雙功能抗體基因工程藥物

在審

• 申請號: 201310312220.3
• 申請日: 2013-07-23
• 公開（公告）號: CN104342452A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 易俊波;周兆平;蘇慶寧;買制剛;章剛;王玉樹;雷明軍;林楓
• 申請（專利權）人: 深圳大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/66;C07K19/00
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司 44217
• 代理人: 汪麗

1.一種雙功能抗體的構建方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A：分別獲取抗體的重鏈恒定區基因、抗體的輕鏈恒定區基因、第一目的基因和第二目的基因；

B：采用表達載體構建包括所述抗體的重鏈恒定區基因、所述抗體的輕鏈恒定區基因、所述第一目的基因和所述第二目的基因的重組載體穿梭質粒；

C：將步驟B中形成的重組載體穿梭質粒轉染至表達細胞株中進行培養，表達得到所述雙功能抗體。

2.根據權利要求1所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，在所述步驟A中，根據目標抗原決定簇獲取所述第一目的基因和所述第二目的基因。

3.根據權利要求1或2所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，所述步驟A包括：

設計所述抗體的重鏈恒定區基因的引物、所述抗體的輕鏈恒定區基因的引物、所述第一目的基因的引物和所述第二目的基因的引物；

引物1：5’-CCC?AAG?CTT?CCA?AAA?CGA?CAC?CCC?CAT?CTG-3’；

引物2：5’-AAA?AGG?GAC?TCC?CCG?GTT?CAT?CTA?GGG?CGC?TTG?CCCAAT?CAT-3’；

引物3：5’-GTC?GCG?GCC?GC?ACT?GTG?GCT?GCA?CCA?TCT?GTC-3’；

引物4：5’-GAA?GAG?AAA?TAA?ATA?AAC?AAT?CAT?ACA?CTC?TCC?CCTTTT?GAA?GCT-3’；

引物5：5’-ATG?ATT?GGG?CAA?GCG?CCC?TAG?ATG?AAC?CGG?GGAGTC?CCT?TTT-3’；

引物6：5’-AGA?GGA?TCC?CCA?GGT?GCC?ACT?ATC?CTG?GAG-3’；

引物7：5’-TTC?AAA?AGG?GGA?GAG?TGT?ATG?ATT?GTT?TAT?TTT?CTCTTC-3’；

引物8：5’-GAA?GGTACC?CAA?GCC?CAC?AGA?TAT?TTCCTG-3’；

基于PCR方法，使用引物1和引物2擴增出所述抗體的重鏈恒定區基因，使用引物3和引物4擴增出所述抗體的輕鏈恒定區基因，使用引物5和引物6擴增出所述第一目的基因，以及使用引物7和引物8擴增出所述第二目的基因。

4.根據權利要求1所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，在步驟B中，所述表達載體是pCDNA3.1/His?C、pCDNA5/FRT/TO?TOPO?TA、pEGFP-N1或pBudce4.1。

5.根據權利要求1所述的雙功能抗體的構建方法，其特征在于，在步驟C中，所述表達細胞株為293細胞、AD293細胞或中國倉鼠卵巢細胞。

6.一種雙功能抗體，包括抗體的重鏈恒定區和抗體的輕鏈恒定區，其特征在于，所述雙功能抗體還包括分別與所述抗體的重鏈恒定區和所述抗體的輕鏈恒定區相連接的第一目的蛋白和第二目的蛋白。

7.根據權利要求6所述的雙功能抗體，其特征在于，所述抗體的重鏈恒定區還包括激活免疫功能的抗體Fc片段。

8.根據權利要求6或7所述的雙功能抗體，其特征在于，所述第一目的蛋白為CD4，第二目的蛋白為CCR5。

9.一種雙功能抗體基因工程藥物，其特征在于，含有權利要求6-8中任一權利要求的雙功能抗體。