[發(fā)明專利]一種制備帕立骨化醇的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310311847.7
• 申請日: 2013-07-23
• 公開（公告）號: CN103451238A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸群;馮海婷;文鵬;孫博;萬陽;周傲群
• 申請（專利權(quán)）人: 西南交通大學(xué)
• 主分類號: C12P7/02
• 分類號: C12P7/02;C07C401/00;C12R1/01
• 代理公司: 成都信博專利代理有限責(zé)任公司 51200
• 代理人: 張澎

1.一種制備帕立骨化醇的方法，以維生素D₂為原料，采用如下的化學(xué)反應(yīng)和生物反應(yīng)步驟獲得治療骨質(zhì)疏松癥藥物帕立骨化醇：1-α-羥基-19-去亞甲基維生素D₂（ix）:

化學(xué)反應(yīng)部分：

高錳酸鉀水溶液在-20℃下，以醇類溶劑溶解環(huán)化物（ⅲ）:滴加濃度為5-20%的高錳酸鉀水溶液，攪拌反應(yīng)1-10小時最好3小時，濃縮去除水，殘余物用同體積乙醇稀釋；0℃下，加入10-20%的高碘酸鈉水溶液，攪拌2-5小時，最好3小時，用等體積1-5個碳的氯代烷烴，1-5個碳的羧酸酯等萃取，濃縮至干，得到10羰基環(huán)化維生素D₂（ⅳ）；在-78℃下，滴加非極性溶劑的強(qiáng)堿，加入三氟甲烷磺酸酐、N-苯基雙(三氟甲烷磺酰)亞胺，得到烯醇基三氟甲烷磺酸酯（V）;用甲酸及醋酸鈀還原得到1,10雙鍵的環(huán)己烯衍生物（ⅵ），使用硼氫化試劑經(jīng)堿性過氧化氫氧化得到1-羥基-19-去甲維生素D₂(ⅶ)，采用低分子有機(jī)酸開環(huán)，洗滌后再經(jīng)4%的氫氧化鈉甲醇溶液水解得到1-羥基-10去甲維生素D₂（ⅷ）;

生物反應(yīng)部分

1-羥基-19-去甲維生素D₂(ⅷ)作為底物用菌株CGMCC5098在通氣攪拌的狀態(tài)下，在碳源、氮源、礦物鹽的培養(yǎng)基中進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，發(fā)酵溫度22-30℃，最好是27℃，pH范圍6.5-7.5，最好是7.0，通氣量在0.5-1.0v/v/min；將1-羥基-19-去甲維生素D₂(ⅷ)作為底物加入到培養(yǎng)液中，底物濃度最好是1-15g/升，底物加入培養(yǎng)基的時間通常是在碳源將近消耗完時加入底物最佳，通常是常是菌株培養(yǎng)2天后加入底物；

在繼續(xù)上述的培養(yǎng)的過程中產(chǎn)生25位的羥基化生物轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化的時間取決于培養(yǎng)基的組成和菌株，通常繼續(xù)培養(yǎng)1-7天，最好是4天；最后經(jīng)固液分離，分別對菌絲和濾液用有機(jī)溶劑抽提，經(jīng)硅膠柱層析，丙酮/水重結(jié)晶得到純的得到目標(biāo)產(chǎn)物1-羥基-25-羥基-19-去甲維生素D₂(ⅸ)，即帕立骨化醇。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備帕立骨化醇的方法，其特征在于，所述溶解環(huán)化物（ⅲ）的醇類溶劑可為：乙醇、丙醇、異丙醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備帕立骨化醇的方法，其特征在于，所述由10羰基環(huán)化維生素D₂（ⅳ）得到烯醇基三氟甲烷磺酸酯（V）步驟中所滴加非極性溶劑的強(qiáng)堿可為：六甲基二胺基鋰、正丁基鋰、叔丁基鋰、氨基鈉。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備帕立骨化醇的方法，其特征在于，所述由1,10雙鍵的環(huán)己烯衍生物（ⅵ）經(jīng)堿性過氧化氫氧化得到1-羥基-19-去甲維生素D₂(ⅶ)步驟中所用硼氫化試劑可為：9-硼二環(huán)[3.3.1]壬烷（9-BBN），硼烷、二異松蒎基氯硼烷，二乙基甲氧基硼烷。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備帕立骨化醇的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)基采用：

種子培養(yǎng)基：1.5﹪葡萄糖，1.5﹪黃豆餅粉，0.5﹪玉米漿，0.5﹪NaCl，0.2﹪CaCO3，pH自然；121℃滅菌20min；

發(fā)酵培養(yǎng)基：1.5﹪葡萄糖，2.0﹪黃豆餅粉，1.0﹪玉米漿，0.5﹪NaCl，0.2﹪CaCO3，pH自然；121℃滅菌20min；

一級種子以1-10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵溫度28℃，通氣量0.5v/v/min，培養(yǎng)48小時。