[發(fā)明專利]利用薇甘菊萎蔫病毒生物控制薇甘菊的試劑盒和方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201310311469.2 | 申請日： | 2013-07-23 |
| 公開（公告）號： | CN103361318A | 公開（公告）日： | 2013-10-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 王瑞龍;曾任森;鄭子豪;任勇;張暉;宋圓圓;蘇貽娟 | 申請（專利權(quán)）人： | 華南農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | C12N7/00 | 分類號： | C12N7/00;C12N7/02;A01N63/00;A01P13/00;C12R1/94 |
| 代理公司： | 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245 | 代理人： | 裘暉 |
| 地址： | 510642 廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 利用 甘菊 萎蔫 病毒 生物 控制 試劑盒 方法 | ||
1.一種薇甘菊萎蔫病毒，其特征在于命名為蠶豆病毒屬（Fabavirus）薇甘菊萎蔫病毒MMWV-5（Mikania?micrantha?wilt?virus，MMWV-5），保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），地址：中國武漢武漢大學(xué)，保藏號為CCTCC?NO：V201321，保藏時間為2013年7月10日。
2.權(quán)利要求1所述的薇甘菊萎蔫病毒的繁殖，其特征在于包括以下步驟：
（1）將薇甘菊萎蔫病毒毒原，利用pH7.0的0.01mol/L磷酸緩沖液稀釋后，在25-27℃，常規(guī)汁液摩擦接種，當(dāng)蠶豆幼苗具有3～4片真葉時，在頂部的第1片和第2片真葉上均勻地灑一層石英砂，用齊頭毛筆蘸取接種液在接種葉上輕輕摩擦，隨后用蒸餾水沖洗掉葉片上殘留的物質(zhì)；薇甘菊萎蔫病毒在蠶豆上繁殖，7-10d周采取病葉；
（2）按病葉重量加入2倍體積預(yù)冷的內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)為0.1％巰基乙醇，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01％Triton?X-100，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%蔗糖的pH7.5的0.5mol/L的磷酸鉀鹽緩沖液，勻漿2min，4℃靜置1h，8000g離心20min；
（3）取上清液，加入PEG-6000、NaCl和Triton?X-100，使其濃度分別達(dá)到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%、0.1mol/L、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%，4℃下攪拌6h，8500g離心5min；
（4）取沉淀，用內(nèi)含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01％Triton?X-100的pH7.5的0.01mol/LKPB，充分懸浮，7000g離心10min；
（5）吸取上清液置于離心管，沉淀再懸浮離心，重復(fù)2次，合并上清液；
（6）上清液78000g超速離心2h；
（7）沉淀用pH7.5的0.01mol/L?KPB懸浮，懸浮液低速離心后取上清液，得到提純病毒液。
3.一種利用薇甘菊萎蔫病毒生物控制薇甘菊的試劑盒包含權(quán)利要求1所述的薇甘菊萎蔫病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用薇甘菊萎蔫病毒生物控制薇甘菊的試劑盒，其特征在于：由以下組分組成：
1）權(quán)利要求1所述的薇甘菊萎蔫病毒；
2）內(nèi)含體積分?jǐn)?shù)為0.1％巰基乙醇，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01％Triton?X-100，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%蔗糖的pH7.5的0.5mol/L的磷酸鉀鹽緩沖液；
3）PEG-6000；
4）氯化鈉NaCl；
5）Triton?X-100；
6）內(nèi)含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01％Triton?X-100的pH7.5的0.01mol/L?KPB；
7）400～600目的金剛砂；
8）pH7.0的0.01mol/L磷酸緩沖液。
5.權(quán)利要求3或4所述的利用薇甘菊萎蔫病毒生物控制薇甘菊的試劑盒的使用方法，其特征在于包括噴施接種薇甘菊萎蔫病毒控制薇甘菊和薇甘菊萎蔫病毒的擴繁兩部分。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用薇甘菊萎蔫病毒生物控制薇甘菊的試劑盒的使用方法，其特征在于：所述的噴施接種薇甘菊萎蔫病毒包括以下步驟：
（1）將薇甘菊萎蔫病毒毒原，利用磷酸緩沖液稀釋后，在25-27℃，常規(guī)汁液摩擦接種，當(dāng)蠶豆幼苗具有3～4片真葉時，在頂部的第1片和第2片真葉上均勻地灑一層石英砂，用齊頭毛筆蘸取接種液在接種葉上輕輕摩擦，隨后用蒸餾水沖洗掉葉片上殘留的物質(zhì)；薇甘菊萎蔫病毒在蠶豆上繁殖，7-10d后采取病葉；
（2）按每1g鮮病葉加入30～50mL0.01mol/L磷酸緩沖液的比例，充分研磨，3000r/min離心15min，取上清液備用；
（3）每100mL的上清液中加入0.5g400～600目的金剛砂，充分混勻，利用噴槍進(jìn)行噴施接種，噴嘴距幼苗葉片2cm，空氣壓縮機的工作壓力為2～2.5kg/cm2；
（4）為確保接種成功，可噴施接種兩次，相隔一天；接種時及接種后的溫度以25-27℃為宜，有利于薇甘菊萎蔫病毒的侵染。
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