[發明專利]一種黃芪糖蛋白及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201310311439.1
• 申請日: 2009-07-23
• 公開（公告）號: CN103450354A
• 公開（公告）日: 2013-12-18
• 發明（設計）人: 周然;馮前進;薛慧清;楊向竹;牛欣;趙俊云;宋強;王永輝;張立偉
• 申請（專利權）人: 山西中醫學院
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;A61K38/16;A61P37/06
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 張韜

本申請是第200910089580.5號專利的分案申請。原申請的申請日是2009.07.23，名稱是《一種黃芪糖蛋白及其制備方法和用途》。

發明領域

本發明涉及一種黃芪提取物，特別涉及一種黃芪糖蛋白及其制備方法和用途。

背景技術

糖蛋白（glycoprotein）是一類由糖類與多肽或蛋白質以共價鍵連接而形成的結合蛋白，廣泛地存在于自然界動物植物和某些微生物中，是生物體內重要的一類大分子。20世紀60年代，生物化學家和化學家們對長期忽視的糖蛋白產生了興趣，開展了多方面的研究。越來越多的研究發現，糖蛋白具有顯著的藥用功效和保健功能，能夠增強免疫調節、抑制腫瘤、降低血糖、血脂、抗氧化、防衰老等，對于人體極具利用價值。目前已應用于臨床并具有高效的免疫活性的藥用蛋白制劑大都是糖蛋白。近年來，植物和天然產物來源的糖蛋白，在生物化學、生物工程學、臨床化學、藥學及食品等領域受到高度重視。特別是存在于植物中的糖蛋白，在新型特種藥物及功能性食品開發方面具有廣闊的運用前景。

山西道地藥材黃芪是一種常用補氣固表中藥材，能夠增強機體的免疫功能。自20世紀70年代以來,國內外學者對黃芪化學成分及藥理作用進行了大量的研究，從中提取分離許多黃酮類、皂苷類、多糖等化合物，并對其藥理作用及生物活性進行了研究。但迄今為止,尚未見到有關黃芪糖蛋白的研究報道。

發明內容

本發明目的在于公開一種黃芪糖蛋白，本發明的目的還在于公開該糖蛋白的制備方法，本發明的目的還在于公開該糖蛋白的用途。

本發明目的是通過如下技術方案實現的：

本發明黃芪糖蛋白由如下方法制備：

取黃芪藥材，將其粉碎成粉末狀，稱取200-600重量份，加水1200-2000體積份,浸泡8-16小時，40-60℃以下浸提1-3小時，過濾；殘渣中再加水800-1600體積份，40-60℃以下浸提1-3小時，過濾，合并兩次濾液，以2000-4000r/min速度離心20-40分鐘，合并上清液，得粗提液；

將粗提液濃縮至200-400體積份，加入研磨成粉狀的硫酸銨，邊加邊攪拌至飽和，于2-6℃下靜置12—24小時，以2000-4000r/min速度離心20-40分鐘，棄去上清液，得沉淀；

沉淀加入少量水溶解，再加入硫酸銨至飽和，靜置1-3小時，以2000-4000r/min速度離心20-40分鐘，棄去上清液，沉淀再用少量水溶解，重復上述步驟，得到沉淀，為粗糖蛋白；

把粗糖蛋白加少量水溶解，加入sevag試劑，劇烈振搖10-30分鐘，離心，傾出上清液，除去中間層變性蛋白和下層氯仿，重復該步驟至中間層幾乎無變性蛋白；

將上清液置于透析袋中，純水透析24-72小時，得黃芪糖蛋白溶液，經冷凍干燥，得乳白色粉狀物黃芪糖蛋白（HQGP）。

本發明黃芪糖蛋白優選如下方法制備：

取黃芪藥材，將其粉碎成粉末狀，稱取400重量份，加水1600體積份,浸泡12小時，55-60℃以下浸提2小時，過濾；殘渣中再加水1200體積份，55-60℃以下浸提2小時，過濾，合并兩次濾液，以3000r/min速度離心30分鐘，合并上清液，得粗提液；

將粗提液濃縮至300體積份，加入研磨成粉狀的硫酸銨，邊加邊攪拌至飽和，于4℃下靜置12小時，以3000r/min速度離心30分鐘，棄去上清液，得沉淀；

沉淀加入少量水溶解，再加入硫酸銨至飽和，靜置2小時，以3000r/min速度離心30分鐘，棄去上清液，沉淀再用少量水溶解，重復上述步驟，得到沉淀，為粗糖蛋白；

把粗糖蛋白加少量水溶解，加入sevag試劑，劇烈振搖20分鐘，離心，傾出上清液，除去中間層黃色膠狀變性蛋白和下層氯仿，重復該步驟至中間層幾乎無變性蛋白；

將上清液置于透析袋中，在空氣恒溫振蕩器上用純水透析48小時，得黃芪糖蛋白溶液，經冷凍干燥，得乳白色粉狀物黃芪糖蛋白（HQGP）。

本發明黃芪糖蛋白優選如下方法制備：

取黃芪藥材，將其粉碎成粉末狀，稱取300重量份，加水1900體積份,浸泡9小時，50℃以下浸提3小時，過濾；殘渣中再加水1500體積份，50℃以下浸提1小時，過濾，合并兩次濾液，以3500r/min速度離心35分鐘，合并上清液，得粗提液；

將粗提液濃縮至250體積份，加入研磨成粉狀的硫酸銨，邊加邊攪拌至飽和，于3℃下靜置24小時，以3500r/min速度離心35分鐘，棄去上清液，得沉淀；