[發(fā)明專利]從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310307858.8
• 申請日: 2013-07-22
• 公開（公告）號: CN103333240A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 莫麗影;何興鳳;吳志捷;袁曉勤
• 申請（專利權(quán)）人: 北海開元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/30
• 代理公司: 北海市海城區(qū)佳旺專利代理事務(wù)所(普通合伙) 45115
• 代理人: 黃建中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及的是從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法。屬于血液制品的制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

人血白蛋白是一種血液制品，從人血漿中提取，能夠增加患者的血容量和維持血漿膠體滲透壓，在治療因燒傷等原因引起了體液大量流失方面具有非常重要的作用，此外，人血白蛋白還起著營養(yǎng)供給、運輸及解毒和對其它血漿蛋白的膠體保護和穩(wěn)定的作用。

目前世界上各血液制品生產(chǎn)廠家均參照Cohn6法或Kistler-Nitchmann?低溫乙醇法適當(dāng)改進生產(chǎn)人血白蛋白，此類技術(shù)為低溫乙醇分級沉淀技術(shù)，通過有效控制蛋白質(zhì)沉淀的五個因素：pH值、溫度、蛋白質(zhì)濃度、離子強度、乙醇濃度來逐級沉淀血漿中的不同蛋白質(zhì)，一般分離人血白蛋白的步驟為先從血漿中去除組分Ⅰ，再去除組分Ⅱ＋Ⅲ，然后去除組分Ⅳ，最后沉淀提取組分Ⅴ即人血白蛋白。在人血白蛋白生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的組分Ⅳ一般作為雜質(zhì)被廢棄，但是由于分級沉淀過程中的影響因素很多，傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝中，組分Ⅳ沉淀中夾雜有一定量未能被分離的人血白蛋白，也被同時棄去，造成材料的浪費，也為制造人血白蛋白原料造成緊缺，因此，從廢棄的沉淀中回收人血白蛋白，緩解國內(nèi)原料血漿供應(yīng)緊張的局面顯得十分重要，為此，公告號是CN1305903C，名稱是：一種從沉淀組分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法，以及公告號是CN102311497A，名稱是：一種用低溫乙醇法從組份Ⅳ沉淀中回收白蛋白的方法，均提供了從沉淀組份Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中回收白蛋白的方法，具有一定的積極意義，然而，所提供的方法均是熱處理法，將沉淀組份Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ稀釋后加熱至68℃這一臨界點，使除了白蛋白外所有蛋白質(zhì)均變性，從而與白蛋白分離開，提取出白蛋白，但熱處理法一方面回收率低，另一方面在回收過程中除白蛋白外的所有蛋白均變性，不能從中提取其他物質(zhì)，使得提取成本增高。因此，尋求一種更理想的不需加熱的從沉淀組份Ⅳ中回收白蛋白的方法，就具有了十分重要的現(xiàn)實意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，克服現(xiàn)有技術(shù)熱處理法所存在的不足，有效地解決從組分Ⅳ中提取人血白蛋白，以滿足人們對人血白蛋白制品的需求問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了下述技術(shù)方案，從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，包括以下具體技術(shù)步驟：

（1）組分Ⅳ沉淀溶解

將組分Ⅳ沉淀放入2倍重量的1～2℃，8～10g/L的氯化鈉中，攪拌溶解，保持溶液溫度-1～-2℃,攪拌溶解5～6小時，即為組分Ⅳ沉淀溶解液。

（2）純化

①將組分Ⅳ沉淀溶解液打入稀釋液中稀釋，稀釋液的量為組分Ⅳ沉淀溶解液的3～4倍，稀釋后將制品攪拌降溫到-2~-3℃，按0.8~1.2L/分鐘的速度緩慢加入1mol/L碳酸氫鈉，調(diào)整制品pH值至6.1～6.4，-2～-3℃條件下攪拌6～8小時，得到組分Ⅳ溶解液備用；

其中稀釋液的配制是：含氯化鈉0.15mol/L?,乙醇濃度27～30％（V/V），攪拌降溫到-2~-3℃；

②于組分Ⅳ溶解液中加入-20℃以下95%的乙醇，使組分Ⅳ溶解液中乙醇濃度達到40～42％（V/V），乙醇加入速度保持到70～80L/h，加入過程中保持溶液溫度-2～-3℃，乙醇加畢，用1mol/L的碳酸氫鈉調(diào)整溶液pH值至6.6～6.7，降溫使組分Ⅳ溶解液的溫度至-5.5～-6℃，恒溫攪拌6～8小時得到組分Ⅳ稀釋液備用；

③向組分Ⅳ稀釋液中加入硅藻土，加入量為每100Kg組分Ⅳ沉淀用3～5Kg硅藻土，攪拌30-40分鐘后用壓濾機壓濾，壓濾結(jié)束后用冷壓縮空氣吹盡壓濾機腔內(nèi)液體，到出氣泡為止，收集濾液，得到組分Ⅳ壓濾液備用，沉淀棄丟；

（3）組分Ⅴ沉淀的制備

①計量組分Ⅳ壓濾液體積，開啟攪拌，降溫，制品降溫到-6～-7℃，緩慢加入2mol/L?HAC，加入速度為50-60ml/min，調(diào)整溶液pH至5.2～5.5，調(diào)整完pH后將制品降溫至-8～-9℃并攪拌2小時，靜放6～8小時；

②開啟攪拌，向組分Ⅳ壓濾液中加入硅藻土，加入量以每100Kg?組分Ⅳ沉淀加1～2Kg硅藻土，攪拌30-40分鐘后開始壓濾，濾液棄丟或收集后進行乙醇回收處理；收集組分Ⅴ沉淀備用；

（4）?組分V精制純化

①?組分V沉淀用5倍體積的8%（V/V）乙醇溶液攪拌溶解，沉淀完全溶解后，測量溶液pH應(yīng)在pH至4.50～4.70，制品最終溫度控制為-3.0℃±0.5℃，繼續(xù)攪拌2~3小時壓濾；