[發明專利]從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法

有效

• 申請號: 201310307858.8
• 申請日: 2013-07-22
• 公開（公告）號: CN103333240A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 莫麗影;何興鳳;吳志捷;袁曉勤
• 申請（專利權）人: 北海開元生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/30
• 代理公司: 北海市海城區佳旺專利代理事務所(普通合伙) 45115
• 代理人: 黃建中

1.從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于所述方法包括以下具體技術步驟：

（1）組分Ⅳ沉淀溶解

將組分Ⅳ沉淀放入2倍重量的1～2℃，8～10g/L的氯化鈉中，攪拌溶解，保持溶液溫度-1～-2℃,攪拌溶解5～6小時，即為組分Ⅳ沉淀溶解液；

（2）純化

①將組分Ⅳ沉淀溶解液打入稀釋液中稀釋，稀釋液的量為組分Ⅳ沉淀溶解液的3～4倍，稀釋后將制品攪拌降溫到-2~-3℃，按0.8~1.2L/分鐘的速度緩慢加入1mol/L碳酸氫鈉，調整制品pH值至6.1～6.4，-2～-3℃條件下攪拌6～8小時，得到組分Ⅳ溶解液備用；

其中稀釋液的配制是：含氯化鈉0.15mol/L?,乙醇濃度27～30％（V/V），攪拌降溫到-2~-3℃；

②于組分Ⅳ溶解液中加入-20℃以下95%的乙醇，使組分Ⅳ溶解液中乙醇濃度達到40～42％（V/V），乙醇加入速度保持到70～80L/h，加入過程中保持溶液溫度-2～-3℃，乙醇加畢，用1mol/L的碳酸氫鈉調整溶液pH值至6.6～6.7，降溫使組分Ⅳ溶解液的溫度至-5.5～-6℃，恒溫攪拌6～8小時得到組分Ⅳ稀釋液備用；

③向組分Ⅳ稀釋液中加入硅藻土，加入量為每100Kg組分Ⅳ沉淀用3～5Kg硅藻土，攪拌30-40分鐘后用壓濾機壓濾，壓濾結束后用冷壓縮空氣吹盡壓濾機腔內液體，到出氣泡為止，收集濾液，得到組分Ⅳ壓濾液備用，沉淀棄丟；

（3）組分Ⅴ沉淀的制備

①計量組分Ⅳ壓濾液體積，開啟攪拌，降溫，制品降溫到-6～-7℃，緩慢加入2mol/L?HAC，加入速度為50-60ml/min，調整溶液pH至5.2～5.5，調整完pH后將制品降溫至-8～-9℃并攪拌2小時，靜放6～8小時；

②開啟攪拌，向組分Ⅳ壓濾液中加入硅藻土，加入量以每100Kg?組分Ⅳ沉淀加1～2Kg硅藻土，攪拌30-40分鐘后開始壓濾，濾液棄丟或收集后進行乙醇回收處理；收集組分Ⅴ沉淀備用；

（4）?組分V精制純化

①?組分V沉淀用5倍體積的8%（V/V）乙醇溶液攪拌溶解，沉淀完全溶解后，測量溶液pH應在pH至4.50～4.70，制品最終溫度控制為-3.0℃±0.5℃，繼續攪拌2~3小時壓濾；

????②?壓濾：壓濾過程中攪拌不停，壓濾完后，用低溫冷空氣吹出濾器內液體，至出氣泡后停止，后用FV精制平衡液沖洗濾板，沖洗液并入到過濾液中得到純化液備用；

其中FV精制平衡液的配制：含乙醇12%（V/V），溶液pH值4.50~4.?70，降溫至-3.0℃±0.5℃；

（5）超濾

①?開啟攪拌，用1M碳酸氫鈉調整純化液pH值至7.0～7.2；

②?將純化液首次超濾濃縮至蛋白濃度100～150g/L，用5倍的9g/L的氯化鈉溶液等體積透析，再用3倍的注射用水等體積透析得到白蛋白原液，將白蛋白原液最終超濾濃縮至蛋白質含量210g/L以上，用適量注射用水洗滌超濾膜，收集洗膜液，并入上述蛋白液中即為人血白蛋白原液，取樣進行原液檢測；

（6）半成品配制

根據原液檢定進行稀釋配制：根據原液蛋白質含量進行配制，按每克蛋白質160毫摩爾稱取辛酸鈉，按每克蛋白質120～130毫摩爾稱取氯化鈉，稱取后以少量注射用水溶解，加入人血白蛋白原液，再將人血白蛋白原液稀釋至蛋白質濃度195～200g/L，調整pH值在6.8～7.0；

（7）巴氏滅活：將制品進行60℃10小時滅活病毒，滅活后除菌分裝。

2.根據權利要求1所述的從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于所述硅藻土指的是經過180℃干烤2.5小時，降溫至0℃以下的硅藻土。

3.根據權利要求1所述的從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于制備過程中壓濾時，壓濾機的準備是：每100Kg組分Ⅳ沉淀裝6-25張濾板，安裝濾板后，用注射用水沖洗壓濾機至沖洗液細菌內毒素為陰性，以每臺壓濾機3-5Kg的量向FIV平衡液或FV平衡液中加入硅藻土，攪拌后將其泵入壓濾機進行循環冷卻，壓濾機出口溫度到-3℃以下時，停止循環，冷空氣吹出壓濾機腔內平衡液。

4.根據權利要求3所述的從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于所述FIV平衡液的配制方法是：含40%（V/V）的乙醇，1.5～2.5g/L的?氯化鈉，4.5～5.1g/L的無水乙酸鈉，用醋酸調整pH值至6.0～6.1，溶液溫度-6～-7℃，配制量為每臺壓濾機600L。

5.根據權利要求3所述的從組分Ⅳ沉淀中回收人血白蛋白的方法，其特征在于所述FV平衡液的配制方法是：注射用水230L，加95％乙醇170L，降溫到-8～-9℃，配制量為每臺壓濾機400L。