[發(fā)明專利]一種綠針假單胞菌及其發(fā)酵培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310307236.5
• 申請日: 2013-07-19
• 公開（公告）號: CN103333845A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔新進(jìn);馮鎮(zhèn)泰;張紅艷;沈麗娟;王香秀;張進(jìn)武
• 申請（專利權(quán)）人: 上海農(nóng)樂生物制品股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01P3/00;C12R1/38
• 代理公司: 上海科盛知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31225
• 代理人: 蔣亮珠

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一株生防菌株，尤其是涉及一種綠針假單胞菌及其發(fā)酵培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)

植物根際中存在著一些有益的細(xì)菌，它們可以通過直接或間接的方式促進(jìn)植物生長并對由病原菌引起的植物病害起到防治作用，這些能夠促進(jìn)植物生長、防治病害并增加作物產(chǎn)量的微生物統(tǒng)稱為植物根際促生菌(plant?growth?promoting?rhizobacteria，PGPR)。此類根際微生物種類豐富多樣，選擇適當(dāng)?shù)母H促生細(xì)菌對植物進(jìn)行處理(如浸種或噴霧)，可以改善根際微生態(tài)環(huán)境、促進(jìn)植物生長、抑制或減輕植物病害、減少化肥和農(nóng)藥投入、減輕環(huán)境污染等作用。本發(fā)明提供的細(xì)菌是從植物根部分離獲得，屬于根際促生細(xì)菌。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是為了提供一種具有防治病害作用的綠針假單胞菌及其發(fā)酵培養(yǎng)方法。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種綠針假單胞菌，其特征在于，該綠針假單胞菌，在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?No.6773。

所述的綠針假單胞菌的形態(tài)特征為：菌體為桿狀，0.3μm～0.8μm×1.0μm～1.1μm，革蘭氏染色陰性，無芽孢，單極生鞭毛，能運動，在KMB培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h后可形成1.2mm菌落，菌落可產(chǎn)生橙色色素，圓形，表面凸起，光滑，較粘稠，易挑起，邊緣整齊。

所述的綠針假單胞菌的生理生化特征為：能產(chǎn)生熒光色素，能水解精氨酸雙水解酶、脂酶、氧化酶、過氧化氫酶、檸檬酸鹽、明膠，不水解淀粉，也不產(chǎn)生H₂S，都不能利用聚β-羥基丁酸鹽作碳源。最適培養(yǎng)溫度為28℃～30℃，最適生長pH值為7.0～7.5，可產(chǎn)生橙色非熒光色素，能利用卵磷脂酶，可把蔗糖轉(zhuǎn)化為果聚糖，不產(chǎn)生膿青素，也不進(jìn)行反硝化作用。最適生長的NaCl濃度為0～6％，當(dāng)NaCl濃度大于7％時，生長被抑制。

一種綠針假單胞菌的發(fā)酵培養(yǎng)方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1)將經(jīng)活化的綠針假單胞菌nlsy001接種到該菌專用發(fā)酵培養(yǎng)基中，在26-28℃、pH6.5-7.2下培養(yǎng)18-28小時，得到種子液；

2)將步驟1)制備的種子液接種到該菌專用發(fā)酵培養(yǎng)基中，在26-28℃、pH6.5-7.2下通氣培養(yǎng)；

所述步驟1)和步驟2)中專用發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：每1000毫升水中含玉米粉10-15克，豆餅粉30-40克，K₂HPO₄0.1-0.2克，KH₂PO₄0.15-0.25克，MgSO₄0.4-0.5克，起始pH6.5-7.5。

步驟1)中對綠針假單胞菌nlsy001菌株進(jìn)行活化的方法為：將該綠針假單胞菌nlsy001菌株接種到KB培養(yǎng)基中，在26-28℃下培養(yǎng)18-28小時；所述KB的配方為：每1000毫升水中含含蛋白胨20克、甘油15毫升、K₂HPO₄0.392克和MgSO₄0.732克，pH為6.5-7.5。

所述的綠針假單胞菌nlsy001專用發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：每1000毫升水中含玉米粉10克，豆餅粉35克，K₂HPO₄0.15克，KH₂PO₄0.2克，MgSO₄0.4-0.5克，起始pH6.5-7.5。

步驟1)中的接種比例為2-5％，培養(yǎng)條件為在26℃、pH6.8、220rpm下震蕩培養(yǎng)；步驟2)中的接種比例為6-8％，通氣量以發(fā)酵液與每分鐘通氣量體積比計為1∶0.2-0.4，培養(yǎng)所用培養(yǎng)罐的罐壓為1.2-1.8F/cm²，培養(yǎng)罐帶有攪拌裝置，攪拌速度為180-240rpm，培養(yǎng)時間為24-48小時。

步驟2)的發(fā)酵培養(yǎng)條件為在26℃、pH6.8下進(jìn)行，培養(yǎng)時間為36-48小時。

一種綠針假單胞菌的應(yīng)用，其特征在于，以綠針假單胞菌nlsy001CGMCC?No6773為活性成分的菌劑。

將綠針假單胞菌nlsy001CGMCC?No6773的發(fā)酵液與干燥無菌的填充料按重量比5-10∶1混合后，壓濾，再遮蔭風(fēng)干，得到綠針假單胞菌nlsy001CGMCCNo6773菌劑；所述填充料為草炭或硅藻土，細(xì)度為150-250目。

所述得到的菌劑為150-250目的草炭、硅藻土或高嶺土調(diào)整至最終的含水量為35％以下。