[發(fā)明專利]一種提高變色栓菌（Trametes versicolor）漆酶產(chǎn)量的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310306641.5 | 申請(qǐng)日： | 2013-07-19 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN103409381A | 公開（公告）日： | 2013-11-27 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 劉春朝;王鋒;郭晨 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院過程工程研究所 |
| 主分類號(hào)： | C12N9/02 | 分類號(hào)： | C12N9/02;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 100190 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 提高 變色 trametes versicolor 產(chǎn)量 方法 | ||
1.一種提高變色栓菌（Trametes?versicolor）漆酶產(chǎn)量的方法，其特征在于，所述方法包括：在變色栓菌漆酶發(fā)酵過程的菌絲體生長(zhǎng)階段，向發(fā)酵液中添加法尼醇，并繼續(xù)發(fā)酵以產(chǎn)生漆酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述法尼醇添加的終濃度為10～100μM，優(yōu)選為30～80μM，更優(yōu)選為40～60μM。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，以法尼醇溶液的形式向發(fā)酵液中添加法尼醇，所述法尼醇溶液的配制溶劑為乙醇、正丙醇、異丙醇和正丁醇中的一種或至少兩種的混合，優(yōu)選為乙醇或異丙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟：
（1）將預(yù)培養(yǎng)的變色栓菌菌絲體接種到漆酶發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
（2）在所述發(fā)酵培養(yǎng)過程的菌絲體生長(zhǎng)階段，向發(fā)酵液中添加法尼醇溶液；
（3）在菌絲體生長(zhǎng)結(jié)束并進(jìn)入漆酶合成階段后，選擇適于漆酶表達(dá)和分泌的pH、攪拌速率和通氣量，并繼續(xù)培養(yǎng)以產(chǎn)生漆酶；
（4）培養(yǎng)至發(fā)酵液中漆酶活力達(dá)到峰值時(shí)，結(jié)束發(fā)酵并收集發(fā)酵液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中發(fā)酵培養(yǎng)的具體條件：
pH為4.1～6.0，優(yōu)選為4.5～5.5；
攪拌速率為200～400rpm，優(yōu)選為250～350rpm；
通氣量為0.2～0.5vvm，優(yōu)選為0.25～0.45vvm，更優(yōu)選為0.3～0.4vvm。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中：
所述變色栓菌菌絲體接種后的初始生物量為0.5～2g/L，優(yōu)選為0.8～1.6g/L，更優(yōu)選為1～1.5g/L；
所述發(fā)酵培養(yǎng)過程中菌絲體生長(zhǎng)的時(shí)間為24～48h，優(yōu)選為28～44h，更優(yōu)選為32～40h。
7.根據(jù)權(quán)利要求4至6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中：
所述向發(fā)酵液中添加法尼醇溶液為一次性或分多次添加，優(yōu)選一次性添加；
所述法尼醇溶液采用0.22μm濾膜過濾除菌；
所述法尼醇溶液的濃度為所述添加的終濃度的200～2000倍，優(yōu)選為500～1500倍，更優(yōu)選為800～1200倍。
8.根據(jù)權(quán)利要求4至7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中：
所述法尼醇溶液的添加時(shí)間為所述步驟（1）中發(fā)酵培養(yǎng)過程的第0～36h，優(yōu)選為第4～32h，更優(yōu)選為第12～24h。
9.根據(jù)權(quán)利要求4至8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中：
所述pH為6.1～8.0，優(yōu)選為6.5～7.5；
所述攪拌速率為80～180rpm，優(yōu)選為100～150rpm；
所述通氣量為0.05～0.15vvm，優(yōu)選為0.08～0.12vvm。
10.根據(jù)權(quán)利要求4至9中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法具體包括如下步驟：
（1’）在溫度26℃、pH4.1～6.0、攪拌速率200～400rpm和通氣量0.2～0.5vvm的條件下，將預(yù)培養(yǎng)的變色栓菌菌絲體以0.5～2g/L的初始生物量接種到漆酶發(fā)酵培養(yǎng)基中，進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
（2’）在所述發(fā)酵培養(yǎng)過程的第0～36h，一次性向發(fā)酵液中添加法尼醇溶液至法尼醇的終濃度為10～100μM；
（3’）在菌絲體生長(zhǎng)結(jié)束并進(jìn)入漆酶合成階段后，在pH6.1～8.0、攪拌速率80～180rpm和通氣量0.05～0.15vvm的條件下，繼續(xù)培養(yǎng)以產(chǎn)生漆酶；
（4’）培養(yǎng)至發(fā)酵液中漆酶活力達(dá)到峰值時(shí)，結(jié)束發(fā)酵并收集發(fā)酵液。
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