[發(fā)明專(zhuān)利]Miltenberger血型抗體檢測(cè)新方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310305919.7
• 申請(qǐng)日: 2013-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103344772A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁少華;李勇;王紅梅;段生寶;田晶晶;陳曄洲;李冬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/555
• 代理公司: 蘇州廣正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32234
• 代理人: 劉述生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種Miltenberger血型抗體檢測(cè)新方法即非紅細(xì)胞依賴(lài)型Miltenberger血型抗體檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

MNS血型系統(tǒng)是繼ABO之后發(fā)現(xiàn)的第二個(gè)血型系統(tǒng)，其抗原的多態(tài)性數(shù)目?jī)H次于Rh血型系統(tǒng)。MNS血型系統(tǒng)中有一類(lèi)特殊的Miltenberger亞血型系統(tǒng)，其血型抗原是以人血清免疫抗體所鑒定的一系列低頻率抗原組合的紅細(xì)胞表型。該亞系統(tǒng)中Mur、Mil等幾個(gè)抗原的發(fā)生頻率在歐洲白人中低于千分之一，而在中國(guó)人和其他亞洲人群中為3％～10％。一項(xiàng)針對(duì)844名廣西侗族人群的調(diào)查顯示，Mur稀有血型抗原陽(yáng)性率為15.4％，而林瑪利等人在1990年針對(duì)臺(tái)灣各種族的調(diào)查顯示，高山原居民的阿美族的Mur血型陽(yáng)性率則高達(dá)88.4％。

抗-Mur發(fā)生率在東南亞地區(qū)很高，特別是在我國(guó)臺(tái)灣、香港人群中抗-Mur的發(fā)生頻率甚至僅次于抗-A/抗-B。臨床報(bào)告證實(shí)抗-Mur抗體會(huì)導(dǎo)致同種異型免疫性疾病，如輸血不良反應(yīng)、新生兒溶血病等。伴隨全球化進(jìn)程，各種族和各國(guó)人口在全世界的流動(dòng)加快，使得Miltenberger抗原在世界各國(guó)的臨床意義日益重要。血液免疫學(xué)理論和臨床實(shí)際都明確提出，在亞洲各國(guó)應(yīng)用的血型抗體篩查紅細(xì)胞組和血型抗體鑒定的譜細(xì)胞中應(yīng)該有Miltenberger血型抗原陽(yáng)性紅細(xì)胞。由于缺少相關(guān)試劑，多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)使用的抗體篩查細(xì)胞中并沒(méi)有包含Miltenberger血型抗原，常規(guī)檢測(cè)無(wú)法鑒定抗體的特異性，導(dǎo)致對(duì)存在該抗體的患者漏檢。由于新鮮紅細(xì)胞保存時(shí)間很短，最多3個(gè)月，Miltenberger抗原陽(yáng)性紅細(xì)胞來(lái)源非常有限，Miltenberger血型篩查及其抗體的檢測(cè)受到極大地限制。目前Miltenberger血型抗體檢測(cè)中面臨的幾個(gè)主要問(wèn)題是：1）由于臨床檢測(cè)譜細(xì)胞中未使用相應(yīng)篩選紅細(xì)胞，不規(guī)則抗體經(jīng)常漏檢；2）含有稀有抗原的篩選紅細(xì)胞的穩(wěn)定供應(yīng)得不到長(zhǎng)期保證；3）新鮮紅細(xì)胞保存時(shí)間極短。

由于至今也無(wú)商品化供應(yīng)的抗-Miltenberger血型抗原的單克隆抗體，人源血型試劑（人紅細(xì)胞試劑和人血清抗體試劑）的固有缺點(diǎn)以及沒(méi)有合適的試驗(yàn)方法，世界各國(guó)目前臨床上不能夠常規(guī)開(kāi)展Miltenberger血型相容性試驗(yàn)，只在少數(shù)的大型血液中心和血型參比試驗(yàn)室對(duì)一些疑難的血型不相容疾病病人進(jìn)行相關(guān)的檢驗(yàn)工作。至今，臨床上不能常規(guī)開(kāi)展Miltenberger血型相容性實(shí)驗(yàn)的具體障礙和問(wèn)題是：Miltenberger抗原試劑和抗體試劑都短缺，紅細(xì)胞血球試劑和人血清抗體試劑的固有缺點(diǎn)，以及目前應(yīng)用的免疫血清學(xué)試驗(yàn)技術(shù)方法的缺點(diǎn)等。我國(guó)臨床對(duì)于Miltenberger血型抗原抗體的重要性及檢測(cè)方法的相關(guān)研究也很少，目前僅限個(gè)案報(bào)道。??

澳大利亞CSL公司利用Kode^TM技術(shù)，將合成的多肽抗原連接到紅細(xì)胞上，制備得到篩檢抗-Mur的紅細(xì)胞。這種技術(shù)是將紅細(xì)胞與含有功能（表位）基團(tuán)-連接鏈-脂肪基團(tuán)（function-epitope-spacer?lipid,?FSL）的液體混合一段時(shí)間，攜帶有特殊抗原表位的FSL可以模擬糖脂結(jié)構(gòu)結(jié)合于紅細(xì)胞表面，從而改變紅細(xì)胞的血型。但這種技術(shù)只能增加抗原，而不能封閉原有的紅細(xì)胞抗原。這一篩查紅細(xì)胞已經(jīng)被用來(lái)進(jìn)行大規(guī)模的抗體篩檢。但CSL公司利用Kode^TM技術(shù)所制備的仍然是基于存活紅細(xì)胞的血型抗原試劑，上述提到的幾個(gè)根本問(wèn)題并沒(méi)有得到解決，存在于存活的紅細(xì)胞膜上的血型抗原，由于紅細(xì)胞容易溶血，抗原性也隨之消亡。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種非紅細(xì)胞依賴(lài)型Miltenberger血型抗體檢測(cè)方法，該方法能保障臨床安全、有效、科學(xué)的輸血。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的一個(gè)技術(shù)方案是：提供一種非紅細(xì)胞依賴(lài)型Miltenberger血型抗體檢測(cè)方法，包括步驟為：（1）將羊紅細(xì)胞醛化磁化后與具有連接鏈的多肽抗原偶聯(lián)形成人工篩查細(xì)胞；（2）將所述人工篩查細(xì)胞與檢測(cè)樣本混勻后孵育并洗滌，再加入熒光標(biāo)記二抗孵育并洗滌后測(cè)定結(jié)果。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述醛化過(guò)程是用戊二醛醛化，所述磁化過(guò)程是用磁珠磁化。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述連接鏈的氨基酸序列為GGDGDGDGDG。

在本發(fā)明一個(gè)較佳實(shí)施例中，所述偶聯(lián)的過(guò)程為將所述醛化磁化羊紅細(xì)胞稀釋至體積分?jǐn)?shù)為30-70%，將所述多肽抗原配制濃度為1-5?mg/mL，再將所述醛化磁化羊紅細(xì)胞和所述多肽抗原用滾軸儀在轉(zhuǎn)速為100-300?rpm的條件下混合偶聯(lián)3-6?h，得到人工篩查細(xì)胞。