[發明專利]一種制備高純度L-辛弗林的方法

有效

• 申請號: 201310305483.1
• 申請日: 2013-07-13
• 公開（公告）號: CN103387501A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 顏李秀;周小華;莫卓群;馮琳;萬玉萍
• 申請（專利權）人: 湖南鑫利生物科技有限公司;重慶大學
• 主分類號: C07C215/60
• 分類號: C07C215/60;C07C213/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備高純度L-辛弗林的方法，其特征在于具體方法步驟如下：

(1)制備L-辛弗林原料液

以市售枳實為原料，用粉碎機粉碎后過20目的篩網，未過篩網的顆粒進行下一批次的粉碎，過篩網的粉末進行提取L-辛弗林操作，按枳實粉末質量：0.05～0.1mol/L鹽酸溶液體積之比為1kg∶8～10L的比例，將枳實粉末分散在0.05～0.1mol/L的鹽酸水溶液中，先浸泡1～2h后，再攪拌3～5h，進行第一次提取，接著將提取物在6000～8000r/min的條件下進行第一次離心分離10～20min，分別收集第一次離心分離上清液和沉淀；對收集的第一次離心分離沉淀，按枳實粉末質量：0.05～0.1mol/L鹽酸溶液體積之比為1kg∶4～6L的比例，先將第一次離心沉淀分散于0.05～0.1mol/L鹽酸水溶液中，再攪拌3～5h，進行第二次提取，接著將第二次提取物在6000～8000r/min的條件下進行第二次離心分離10～20min，分別收集第二次離心分離的上清液和沉淀，對收集的第二次離心分離沉淀，用于進一步提取橙皮苷、新橙皮苷和柚皮苷；對收集的第二次離心分離上清液，與第一次離心分離上清液合并，即為L-辛弗林原料液；

(2)制備L-辛弗林脫糖液

在第(1)步完成之后，先將第(1)步收集的L-辛弗林原料液泵入超濾器中，用截留分子量為3000～10000Da的超濾膜，在0.05～0.2MPa的壓力下進行超濾分離。分別收集濾過液和截留液，對收集的截留液，主要含有大分子糖類和蛋白質，用作發酵食用菌的添加劑；對于收集的濾過液，即為L-辛弗林脫糖液；

(3)制備L-辛弗林脫色液

取已活化的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂濕法裝柱，按照大孔吸附樹脂體積：第(2)步制備出的L-辛弗林脫糖液體積的比為1L∶5～15L的比例，將第(2)步制備出的L-辛弗林脫糖液泵入裝有D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂的層析柱中，控制L-辛弗林脫糖液泵入流速為D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂體積的1～5倍/小時(BV/h)，進行脫色處理，處理完成后分別收集吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱和流出的柱后液；對收集的吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，先用3～5倍樹脂體積的蒸餾水沖洗，分別收集水洗液和洗滌后的吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱；對收集的水洗液，與流出的柱后液合并，即為L-辛弗林脫色液；對收集的水洗后的吸附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，用pH為9.5～10.5、乙醇濃度為30％～60％的水溶液洗脫，洗脫液流速為1～5倍樹脂體積/小時(BV/h)，分別收集洗脫液和脫附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，對收集的洗脫液，含大量黃色素，用于減壓濃縮回收乙醇并制備黃色素；對收集的脫附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，用3～5倍樹脂體積的蒸餾水沖洗，分別收集水洗液和水洗后的脫附色素的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，對收集的水洗液，泵入水處理池進行生化處理，達標后排放；對收集的水洗后脫附色素的的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂柱，可用于下批次吸附色素處理；

(4)制備L-辛弗林脫寡糖液

在第(3)步完成之后，按第(3)步制備出的L-辛弗林脫色液體積：95％乙醇體積比為1L∶1～3L的比例，向脫色液中加入95％乙醇，攪拌10～30min后靜置2～4h，過濾并收集濾液和濾渣，對收集的濾渣，用于制備高純度寡糖；對收集的濾液，在40～55℃、真空度為-0.06MPa～-0.09MPa的條件下，進行真空減壓濃縮，分別收集真空減壓濃縮液和冷凝液，對收集的冷凝液，主要含乙醇，調配成乙醇濃度為30％～60％的洗脫水溶液，用于下批次洗脫黃色素；對收集的濃縮液，即為L-辛弗林脫寡糖液；

(5)制備L-辛弗林反滲透濃縮液

第(4)步完成后，先將第(4)步收集的L-辛弗林脫寡糖液泵入反滲透器中，在0.2～0.6MPa的壓力下進行反滲透濃縮，分別收集反滲透濾過液及截留液，對收集的濾過液，調節酸度后用于從下一批次的枳實粉中提取L-辛弗林；對收集的截留液，即L-辛弗林反滲透濃縮液；

(6)制備L-辛弗林凍干粉

第(5)步完成之后，先將第(5)步制備的L-辛弗林反滲透濃縮液在-10～-30℃下，預凍3～5小時，再置于冷凍干燥機中，在真空度為20～60Pa、溫度為-40～-60℃的條件下，冷凍干燥24～30小時，就制備出L-辛弗林凍干粉。

(6)樹脂的再生

將用了10～15次后的D3520、或X-5、或NKA-12、或NKA-9大孔吸附樹脂，用蒸餾水沖洗至流出液清澈不渾濁；再依次用2～3倍樹脂體積的95％乙醇、蒸餾水、5％HCl、蒸餾水、5％NaOH浸泡攪拌2h，最后用蒸餾水洗至中性，備用。