[發明專利]CDK2拮抗劑作為分化治療藥物增敏劑的用途

無效

• 申請號: 201310305180.X
• 申請日: 2013-07-20
• 公開（公告）號: CN103405770A
• 公開（公告）日: 2013-11-27
• 發明（設計）人: 應美丹;何俏軍;楊波;邵雪晶;齊曉甜
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K48/00;A61K31/4178;A61P35/00;A61K31/203
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

???????本發明屬生物制藥領域，涉及利用CDK2拮抗劑提高腫瘤分化治療藥物的敏感性，以應用于臨床腫瘤治療。

背景技術

???????誘導分化治療是腫瘤化學治療的一個重要領域，它應用化學藥物誘導腫瘤細胞分化并逆轉其增殖、浸潤、轉移等惡性表型，使其成為正常或接近正常的細胞，從而達到治療腫瘤的目的。維甲酸類化合物是被研究和臨床應用最為廣泛的分化誘導劑，其中全反式維甲酸（All-trans?retinoid?acid,?ATRA）是第一個成功應用于白血病治療的誘導分化藥物，能夠特異性誘導急性早幼粒細胞性白血病（APL）細胞分化成熟。1988年，上海瑞金醫院率先應用ATRA治療24例APL，23例取得完全緩解（CR）。隨后進行的一系列大樣本隨機對照臨床研究進一步驗證了ATRA治療APL的有效性，明顯降低了化療引發的出血相關死亡率，提高了APL的CR率。

維甲酸對APL細胞的誘導分化作用，使大多數患者臨床上得到緩解，但隨著病人生存期的延長，維甲酸使用過程中仍有一些問題尚待研究解決，如治療中維甲酸毒副作用，特別是高白細胞綜合征及維甲酸綜合征；緩解后單用維甲酸往往數月內復發；治療過程中細胞內維甲酸結合蛋白（CRABP）高表達及細胞色素P450酶促分解代謝使維甲酸治療失效等。因此，尋找新型的分子靶點，并利用該靶點有效促進維甲酸的誘導分化作用，縮短治療進程且改善白血病患者的預后及解決相關耐藥問題是一個亟待解決的問題。

經典的細胞周期理論認為CDK2是完成G1期和進入S期一個不可替代的細胞周期蛋白依賴性激酶，最新研究發現CDK2對于大部分哺乳動物細胞的細胞周期進程來說不是必須的，CDK1可以代償性地彌補CDK2缺失對細胞周期造成的影響。而且近年來包括Nature?Genetics在內的諸多權威期刊報道CDK2具有更廣泛的非細胞周期調控的生物學功能。我們前期研究發現CDK2蛋白水平的下調可提高腫瘤細胞對分化誘導藥物的敏感性，該作用與CDK2調控細胞周期無關，相關研究尚未見文獻報道。隨著對CDK2蛋白結構的不斷認識，近10多年來研究人員報道了越來越多的ATP競爭性CDK2小分子抑制劑，包括SU-9516、CVT313、Nu6102等。目前已有若干對CDK2具有選擇性抑制的小分子抑制劑進入臨床研究，如flavopiridol、7-羥基十字孢堿(UCN-01)、roscovitine(YC202)及氨基噻唑類化合物(MS-387032)等。研究表明CDK2小分子抑制劑被用于抗腫瘤治療的主要機制是可以誘導細胞凋亡從而發揮療效，然而CDK2小分子抑制劑能否增加分化誘導劑的敏感性，特別是能否促進維甲酸類藥物對白血病細胞的誘導分化作用，從而改善白血病患者的預后及解決相關耐藥問題等均尚未見任何報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種?CDK2拮抗劑在制備誘導分化治療藥物的增敏藥物中的用途。所述的CDK2拮抗劑是抑制CDK2基因轉錄和/或翻譯和/或激酶活性，是針對CDK2的siRNA以及小分子化學抑制劑。

所述的針對CDK2的siRNA為表達小干擾RNA的真核表達載體，主要為病毒載體。所述siRNA的DNA序列如SEQ?ID?NO：1所示。

所述針對CDK2的小分子化學抑制劑為細胞周期蛋白（CDK）的選擇性ATP競爭性抑制劑：化合物SU-9516（分子式為C₁₃H₁₁N₃O₂，濃度為0.6~2.4????????????????????????????????????????????????/ml）、化合物CVT-313（分子式為C₂₀H₂₈N₆O₃，濃度為1~4?/ml）、化合物Nu6102（分子式為C₁₈H₂₂N₆O₃S，濃度為4~16?/ml）。最優的化合物SU-9516濃度為1.2/ml，最優的化合物CVT-313濃度為2?/ml，最優的化合物Nu6102濃度為8/ml。

本發明所述CDK2拮抗劑制備的藥物是與誘導分化藥物，尤其是與維甲酸類藥物一起應用。維甲酸類藥物的濃度為0.3~300ng/ml，最優濃度為1.5ng/ml。所述的維甲酸類藥物為ATRA和AM80。