[發明專利]一種利用PbS量子點快速檢測黃曲霉毒素B1的方法

有效

• 申請號: 201310301751.2
• 申請日: 2013-07-16
• 公開（公告）號: CN103399152A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發明（設計）人: 潘道東;朱浩嘉;李樺;孫揚贏;曹錦軒;曾小群
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N27/48
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

技術領域

本發明涉及食品安全檢測領域，尤其是涉及一種利用PbS量子點快速檢測黃曲霉毒素B1的方法。

背景技術

黃曲霉毒素是一類由黃曲霉（Asperillus?flavus）和寄生曲霉（Aspergillus?parasiticus）侵染油料、糧食或其他食品產生毒性次生代謝產物的總稱，是一類具有很強的致突變、致畸、致癌作用的化合物，是目前為止發現的最強致癌物之一。黃曲霉毒素主要污染花生、玉米、谷物、堅果等，另外在豆類、棉籽、肉類、水產品中也有污染，其中以糧油農產品花生和玉米污染最嚴重。黃曲霉毒素種類很多，目前已分離鑒定的有20多種，其中黃曲霉毒素B1（AFB1）的毒性最強，是氰化鉀的10倍，砒霜的68倍，三聚氰胺的416倍，可引起動物急性中毒，抵抗力降低甚至死亡，敏感動物半致死量僅為0.294mg/kg體重。一般在被污染的糧食農產品中，AFB1的含量最多，因此常以AFB1作為評價黃曲霉毒素污染的主要指標。世界各國均對食品中AFB1允許量做了嚴格的限制，這對測定方法靈敏度有很高要求。

目前，對AFB1的檢測手段主要有：高效液相色譜法（HPLC）、薄層層析法（TLC）及酶聯免疫法等。高效液相色譜法雖然靈敏度高，但儀器價格昂貴，程序復雜，前處理凈化要求高，不適合快速檢測。薄層層析法操作繁冗，靈敏度不高，重現性差，易被其它熒光物質干擾，對人和環境污染系數大。酶聯免疫法靈敏度高、特異性強、快速簡便，但試驗中酶的活性易受反應條件影響，試劑壽命較短特別是顯色液需要低溫保存。

量子點(Quantum?dots，QDs)，主要是II-VI族或III-V族化合物，粒徑在1-100nm，是一種準零維的納米材料，不僅具有良好的光學特性，還具有良好的電化學性質，可以作為轉移電子的載體，如在陽極溶出伏安法中，不同元素組成的QDs具有靈敏、穩定的不同的電位溶出峰。目前，國內外還沒有公開任何關于基于PbS量子點結合電化學檢測技術的快速檢測黃曲霉毒素B1的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種具有靈敏度高、選擇性強、穩定性好、準確性高、檢測速度快的利用PbS量子點快速檢測黃曲霉毒素B1的方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種利用PbS量子點快速檢測黃曲霉毒素B1的方法，具體包括以下步驟：

???（1）PbS量子點的制備

????取10mmol/L的Pb(NO₃)₂溶液于三頸燒瓶，在磁力攪拌的條件下，緩慢加入巰基乙酸后，調pH至7，通氮氣除氧25-35min，逐滴加入25mol/L的Na₂S溶液，在N₂保護下反應23-25h后，于轉速10000-12000rpm，離心25-35min，取沉淀用二次蒸餾水和無水乙醇交替清洗各3-4次，將所得固體物質置于45-55℃恒溫真空干燥箱中干燥，所得物質即為PbS量子點；

???（2）PbS量子點耦合黃曲霉毒素B1單抗

取PbS量子點溶于?PBS溶液中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和?N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），超聲混勻，室溫下避光搖蕩培養25-35min后得到混合溶液，將黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶于PBS溶液中配制成1mg/mL的黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶液，將黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶液加入混合溶液中，避光震蕩1.5-2.5h后，再加入巰基乙醇穩定量子點，透析20-28h后，于轉速4000-6000rpm，離心2.5-3.5min，取沉淀用PBS溶液清洗2-4次后，得到量子點標記的單克隆抗體（QD-Ab），將量子點標記的單克隆抗體溶于PBS溶液中，配制成10μg/mL的量子點標記的單克隆抗體溶液，4℃避光保存待用；

（3）基于量子點的免疫競爭檢測