[發(fā)明專(zhuān)利]一種利用PbS量子點(diǎn)快速檢測(cè)黃曲霉毒素B1的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201310301751.2 | 申請(qǐng)日： | 2013-07-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103399152A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-11-20 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 潘道東;朱浩嘉;李樺;孫揚(yáng)贏;曹錦軒;曾小群 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 寧波大學(xué) |
| 主分類(lèi)號(hào)： | G01N33/577 | 分類(lèi)號(hào)： | G01N33/577;G01N27/48 |
| 代理公司： | 寧波奧圣專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 程曉明 |
| 地址： | 315211 浙*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 pbs 量子 快速 檢測(cè) 黃曲霉 毒素 b1 方法 | ||
1.一種利用PbS量子點(diǎn)快速檢測(cè)黃曲霉毒素B1的方法，其特征在于包括以下步驟：
???（1）PbS量子點(diǎn)的制備
????取10mmol/L的Pb(NO3)2溶液于三頸燒瓶，在磁力攪拌的條件下，緩慢加入巰基乙酸后，調(diào)pH至7，通氮?dú)獬?5-35min，逐滴加入25mol/L的Na2S溶液，在N2保護(hù)下反應(yīng)23-25h后，于轉(zhuǎn)速10000-12000rpm，離心25-35min，取沉淀用二次蒸餾水和無(wú)水乙醇交替清洗各3-4次，將所得固體物質(zhì)置于45-55℃恒溫真空干燥箱中干燥，得到PbS量子點(diǎn)；
???（2）PbS量子點(diǎn)耦合黃曲霉毒素B1單抗
取PbS量子點(diǎn)溶于?PBS溶液中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和?N-羥基琥珀酰亞胺（NHS），超聲混勻，室溫下避光搖蕩培養(yǎng)25-35min后得到混合溶液，將黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶于PBS溶液中配制成1mg/mL的黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶液，將黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶液加入混合溶液中，避光震蕩1.5-2.5h后，再加入巰基乙醇穩(wěn)定量子點(diǎn)，透析20-28h后，于轉(zhuǎn)速4000-6000rpm，離心2.5-3.5min，取沉淀用PBS溶液清洗2-4次后，得到量子點(diǎn)標(biāo)記的單克隆抗體，將量子點(diǎn)標(biāo)記的單克隆抗體溶于PBS溶液中，配制成10μg/mL的量子點(diǎn)標(biāo)記的單克隆抗體溶液，4℃避光保存待用；
（3）基于量子點(diǎn)的免疫競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)
酶標(biāo)板中每孔加入100μL?3mg/mL黃曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶聯(lián)物（AFB1-BSA）作為包被原，包被酶標(biāo)板，4℃過(guò)夜，PBST緩沖液洗板3次，每孔加入200μL?3%酪蛋白水溶液封閉，4℃過(guò)夜，PBST緩沖液洗板3次，每孔同時(shí)加入50μL?AFB1溶液和60μL10μg/mL?量子點(diǎn)標(biāo)記的單克隆抗體溶液，37℃孵育1h，PBST緩沖液洗板3次，每孔加入100μL?1mol/L硝酸溶液超聲消化30min，經(jīng)消化后的樣品轉(zhuǎn)移到電解池，在電解池中加入20μL?1mg/mL?Hg2Cl溶液，并用pH4.5的醋酸緩沖液定容至2mL，作為待測(cè)溶液，進(jìn)行下一步電化學(xué)檢測(cè)；
???（4）電極預(yù)處理
????將玻碳電極依次在1.0、0.3、0.05μm粒徑的α-Al2O3拋光粉中反復(fù)打磨至鏡面，然后分別置于體積分?jǐn)?shù)為50%的乙醇溶液、體積分?jǐn)?shù)為50%的硝酸溶液以及二次蒸餾水中超聲清洗4-6min，用微氮?dú)饬鲗⒉Ｌ茧姌O吹干備用；
????（5）測(cè)定方法
?????將待測(cè)溶液中通入高純N2?除氧5-15min，靜止5-15s后，置入旋轉(zhuǎn)電極，開(kāi)動(dòng)電機(jī)旋轉(zhuǎn)預(yù)處理后的玻碳電極，在起始電位-1.0V處富集，富集240s后停止旋轉(zhuǎn)玻碳電極，靜置5-15s，控制方波頻率為30Hz，電位增量為4mV/s，方波幅度為25mV，采用方波伏安法從-0.8V反向掃描至-0.2V，記錄掃描曲線(xiàn)，于-0.52V記錄Pb2+的溶出峰電流，根據(jù)Pb2+的溶出峰電流大小與黃曲霉毒素B1溶液濃度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)關(guān)系，將待測(cè)溶液的Pb2+的溶出峰電流代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，計(jì)算得到黃曲霉毒素B1的含量。
2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用PbS量子點(diǎn)快速檢測(cè)黃曲霉毒素B1的方法，其特征在于：步驟（1）中所述的Pb(NO3)2溶液、所述的巰基乙酸和所述的Na2S溶液的體積比為50:0.25:30。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用PbS量子點(diǎn)快速檢測(cè)黃曲霉毒素B1的方法，其特征在于：步驟（2）中所述的PbS量子點(diǎn)、所述的PBS溶液、所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽、所述的N-羥基琥珀酰亞胺、所述的黃曲霉毒素B1單克隆抗體溶液和巰基乙醇的比例為1.0mg：200μL：1.0mg：1.0mg：20μL：100μL。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用PbS量子點(diǎn)快速檢測(cè)黃曲霉毒素B1的方法，其特征在于：所述的PBS溶液的濃度為0.01M，pH為7.4。
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