[發(fā)明專利]一種人雌二醇（E2）的磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310301550.2
• 申請(qǐng)日: 2013-07-17
• 公開（公告）號(hào): CN103344774A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏振偉;丁建華;余衛(wèi)國(guó);楊旻
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江陰澤成生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74
• 代理公司: 北京金智普華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 巴曉艷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于免疫檢測(cè)分析技術(shù)領(lǐng)域，涉及檢測(cè)血清中雌二醇E2含量的磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒及其測(cè)試方法。

背景技術(shù)

雌二醇（E2）是體內(nèi)主要由卵巢成熟濾泡分泌的一種天然雌激素，能夠促進(jìn)女性生殖器官的生長(zhǎng)發(fā)育、促使第二性征的發(fā)育、對(duì)下丘腦-垂體軸的影響。血清中的雌二醇濃度檢查是下視丘-垂體-生殖腺軸功能指標(biāo)之一，對(duì)診斷某些內(nèi)分泌及婦科疾病有一定的價(jià)值和重要意義。雌二醇含量的改變會(huì)表現(xiàn)出不同的病變。雌二醇含量的改變會(huì)表現(xiàn)出不同的病變。雌二醇增高可見女性性早熟、雙胎妊娠及多胎妊娠、卵巢性索間質(zhì)細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、男性乳房發(fā)育、男性冠心病、男性系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、肝硬變；雌二醇降低表現(xiàn)為女性性發(fā)育不全、先天性卵巢發(fā)育不全（Turner’s?Syndrome）、閉經(jīng)、女性不孕、多囊卵巢綜合征、席漢氏綜合征、完全性或部分性葡萄胎、異位妊娠。另外，人體雌二醇對(duì)促進(jìn)女性生殖系統(tǒng)的生長(zhǎng)發(fā)育、維持生育力以及對(duì)物質(zhì)代謝有著重要影響。近年來，有研究發(fā)現(xiàn)人體中雌二醇含量水平與某些腫瘤，如乳腺癌、子宮癌、肝癌等有顯著的相關(guān)性。因此，發(fā)明一種靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，費(fèi)用較低且適用的分析方法和國(guó)產(chǎn)試劑，對(duì)于國(guó)內(nèi)臨床診斷的推廣和普及，以及計(jì)劃生育的研究都是很有意義的。

化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)于上個(gè)世紀(jì)80年代，繼酶聯(lián)免疫技術(shù)和放免技術(shù)之后發(fā)展起來的新興技術(shù)，相對(duì)于后兩者化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)具有高靈敏度、高特異性，操作簡(jiǎn)便、快速，標(biāo)記結(jié)合物穩(wěn)定，同時(shí)無放射性同位素?fù)p傷和污染等特點(diǎn)，因此近年來在臨床檢測(cè)分析中被廣泛推廣使用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題在于提供一種雌二醇（E2）定量測(cè)定試劑盒及其檢測(cè)方法，采用該試劑盒進(jìn)行E2檢測(cè)具有較高的靈敏度和特異性，操作更簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間更短。

本發(fā)明提供了檢測(cè)E2化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括：磁微粒試劑；E2校準(zhǔn)品；E2質(zhì)控品；E2抗試劑；E2衍生物；清洗濃縮液；發(fā)光底物溶液；樣本稀釋液。

所述的磁微粒試劑為連接羊抗FITC抗體的磁微粒溶液；

所述的校準(zhǔn)品及質(zhì)控品為含有一定量E2抗原的BSA緩沖液；

所述的抗試劑是異硫氰酸熒光素（FITC）標(biāo)記的E2單克隆抗體液；

所述的E2衍生物是堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的E2衍生物；

所述的清洗濃縮液是含有Tris、NaCl和表面活性劑等的緩沖液；

所述的發(fā)光底物溶液是含Lumigen?APS-5發(fā)光液的緩沖液；

本發(fā)明所提供的檢測(cè)E2的樣品前處理方法，包括以下步驟：

1、樣品前處理

對(duì)臨床血清，3000rpm離心5分鐘，取上層液即可進(jìn)行分析測(cè)定。待測(cè)樣品2-8℃存放不得超過48小時(shí)，若48小時(shí)未檢測(cè)，應(yīng)于-20℃以下保存，但不應(yīng)超過30天。

2、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前需將所有試劑放置至室溫；準(zhǔn)備好一次性平底試管和磁分離器及溫育時(shí)用于覆蓋磁分離器的塑料膜；調(diào)節(jié)水浴箱溫度為37℃；準(zhǔn)備化學(xué)發(fā)光測(cè)定儀，并仔細(xì)閱讀儀器使用說明書。

3、試劑準(zhǔn)備

實(shí)驗(yàn)前將試劑盒中各試劑置混勻儀上充分混勻；磁微粒試劑混勻后應(yīng)為均勻懸濁液，無明顯凝集。

4、利用上述檢測(cè)E2的化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑盒檢測(cè)樣品。

本發(fā)明的檢測(cè)方法如下：

（1）加樣與免疫反應(yīng)：在每一平底試管中加入30μl?E2校準(zhǔn)品、質(zhì)控品或待測(cè)樣本；60μl抗試劑，混勻后，37℃溫育20分鐘；60μl酶標(biāo)記E2衍生物，混勻后，37℃溫育20分鐘；加入60μl磁微粒試劑，混勻后，37℃溫育5分鐘；

（2）洗滌：將平底試管在磁分離器上靜置2分鐘，然后弧線傾倒上清液，將試管及磁分離器一同倒置在吸水紙上拍干；每管中加入300μl清洗液，混勻后，將平底試管在磁分離器上靜置2分鐘，然后弧線傾倒上清液，將試管及磁分離器一同倒置在吸水紙上拍干；重復(fù)兩次。

（3）加入發(fā)光底物溶液：每個(gè)試管加入200μl發(fā)光底物。

（4）讀取發(fā)光值：用化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定每管的發(fā)光值。

（5）如遇到高值HOOK樣本，為了避免出現(xiàn)高值HOOK效應(yīng)，建議臨床醫(yī)師根據(jù)其余指標(biāo)選擇合適的稀釋倍數(shù)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、使用磁珠為固相，使免疫反應(yīng)更接近液相，反應(yīng)更充分和迅速，而且使結(jié)合的免疫復(fù)合物更加容易分離，降低了非特異性吸附。