[發明專利]用于鑒定金花茶的SNP分子標記及其應用有效
| 申請號： | 201310300890.3 | 申請日： | 2013-07-17 |
| 公開（公告）號： | CN104293776A | 公開（公告）日： | 2015-01-21 |
| 發明（設計）人： | 宋云;趙竹;徐晗 | 申請（專利權）人： | 中國檢驗檢疫科學研究院 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飛 |
| 地址： | 100029 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 鑒定 金花 snp 分子 標記 及其 應用 | ||
1.用于鑒定金花茶的SNP分子標記，其特征在于，其位于如SEQ?ID?NO.1所示的金花茶GBSSI基因的第141位堿基，此處堿基為T，則鑒定為金花茶物種。
2.權利要求1所述SNP分子標記在金花茶分子標記輔助育種中的應用。
3.用于PCR檢測金花茶的特異性引物對，其特征在于，包括上游引物F5’-CTGTGGACGCAAACATCCACTTGAT-3’和下游引物R5’-CCATGTATTTCTTGCCAGTGCCCT-3’。
4.一種鑒定金花茶的方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）提取待測植物的基因組DNA；
2）以待測植物的基因組DNA為模板，利用權利要求3所述的特異性引物對PCR擴增金花茶GBSSI基因；
3）檢測PCR擴增產物；
其中，金花茶GBSSI基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟3）中采用酶切法檢測PCR擴增產物，酶切產物的瓊脂糖凝膠電泳結果呈現2條帶，則待測植物為金花茶物種；
其中，酶切使用的限制性內切酶為BstXI。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟2）中25μL?PCR反應體系中包括：添加Mg2+的10×EX?Taq緩沖液2.5μL，2.5mM?dNTPs2μL，10μM上、下游引物各1μL，5U/μL?EX?Taq?DNA聚合酶0.2μL，50μg/μL基因組DNA1μL，余量為ddH2O。
7.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟2）中PCR擴增程序為：94℃預變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸50s，35個循環；72℃延伸10min，4℃保存。
8.含有權利要求3所述引物對的用于檢測金花茶的試劑盒。
9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg2+、PCR反應緩沖液、標準陽性模板中的一種或多種。
10.權利要求3所述引物對或權利要求8或9所述試劑盒在檢測金花茶中的應用。
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