[發明專利]聚乙烯吡咯烷酮修飾小麥酯酶的制備方法

有效

• 申請號: 201310300705.0
• 申請日: 2013-07-18
• 公開（公告）號: CN103333877A
• 公開（公告）日: 2013-10-02
• 發明（設計）人: 陸利霞;熊曉輝;陳銘;游京晶
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種采用聚乙烯吡咯烷酮修飾小麥酯酶的制備方法，其特征是對提取制備的小麥酯酶用氧化的聚乙烯吡咯烷酮進行修飾，從而提高小麥酯酶的比活力及熱穩定性。降低酶抑制法檢測有機磷類及氨基甲酸酯類農藥的成本。?

2.根據權利要求1所述的提取制備的小麥酯酶為從小麥面粉中以0.05～0.15mol/L的NaCl的溶液，料液體積比1∶2～6(m∶v)，在28～40℃的振蕩提取40～120min，再經雙層紗布過濾，取得的濾液在3000～6000r/min，4℃離心5～10min，收集上清液；進而以20％-70％硫酸銨鹽析，4℃條件10000r/min離心15～20min收集沉淀，將沉淀采用截留分子量為8000～14000Da透析袋，將透析袋放入蒸餾水透析脫除硫酸銨。即為制備的小麥酯酶。?

3.根據權利要求1所述的氧化的聚乙烯吡咯烷酮為將高碘酸鈉與聚乙烯吡咯烷酮(2～4∶1，m∶m)溶于40～100mL蒸餾水中，25℃避光攪拌反應20～36h后，將所得產物用截留分子量為8000～14000Da的透析袋在蒸餾水中透析10～20h，得到聚乙烯吡咯烷酮的氧化溶液。?

4.根據權利要求1所述的小麥酯酶用氧化的聚乙烯吡咯烷酮進行修飾為將權利要求2制備得到的小麥酯酶與權利要求3得到的氧化的聚乙烯吡咯烷酮溶液按體積比為1∶1～20(v∶v)混合后，在避光25℃下，振蕩10-20h后，加入0.1～0.3mol/LNaBH₄溶液1～2mL繼續振蕩4～6h終止反應，調至pH7.0～8.0，得到聚乙烯吡咯烷酮修飾小麥酯酶。

5.根據權利要求1所述的修飾的小麥酯酶米氏方程中Vmax值增大，Km值減小，小麥酯酶對底物乙酸-1-萘酯的親和力增強，酶比活力提高至原酶活的130～150％，25℃～45℃酶活在100min內保持穩定。?

6.根據權利要求1-5所述，通過氧化聚乙烯吡咯烷酮的修飾，提高了小麥酯酶的比活力、底物親和性及穩定性，降低酶抑制法檢測有機磷類及氨基甲酸酯類農藥的成本。?