[發明專利]一種表面環氧基活化的具有超順磁性微球的合成以及環氧基與蛋白連接的方法有效

申請號：	201310299325.X	申請日：	2013-07-17
公開（公告）號：	CN103386282A	公開（公告）日：	2013-11-13
發明（設計）人：	劉振世;郭翠;夏振偉;劉振華	申請（專利權）人：	江陰澤成生物技術有限公司
主分類號：	B01J13/02	分類號：	B01J13/02;G01N33/531
代理公司：	北京金智普華知識產權代理有限公司 11401	代理人：	巴曉艷
地址：	214434 江蘇省無***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種表面環氧基活化具有順磁性合成以及蛋白連接方法
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【說明書】：

技術領域

本發明中表面環氧基活化的具有超順磁性微球的合成方法是一種系列鐵酸鹽納米磁珠的制備方法，屬于無機材料制備工藝技術領域，環氧基與蛋白連接的實驗采用環氧基（—CH(O)）和氨基（NH2-）發生共價反應屬于生物免疫檢測領域。?

技術背景

磁性微球是一類直徑在納米或微米級的球形復合材料。磁性微球的核心有四氧化三鐵或三氧化二鐵等超順磁性材料構成，外圍包覆聚苯乙烯或葡聚糖等高分子材料。核心物質具有超順磁性，使磁珠可以在外加磁場作用下向磁場方向移動達到分離的目的；外圍高分子材料可以通過物理或化學的方法活化產生氨基（NH2-）、羧基（COOH-）或環氧基（—CH(O)）等基團，可以與蛋白等生物活性分子偶聯。偶聯后的磁珠廣泛應用于生物標記，生物分子的分離，蛋白的純化，抗體純化，分子診斷等領域。?

環氧基活化的磁珠，即表面含有環氧基基團的磁珠，環氧基磁珠與蛋白的連接不需要其他活化劑的加入，磁性微球表面的環氧基（—CH(O)）和蛋白氨基（NH2-）發生共價反應連接。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種表面環氧基活化的具有超順磁性微?球的合成方法和環氧基與蛋白連接的方法。磁性微球的制備方法原料價廉易得，設備簡單，易于實現控制，工藝重復性好，產品質量穩定，操作安全可靠。環氧基與蛋白連接的方法，方法相對簡單，不需要活化劑的加入，實驗設備要求較低，普通實驗室即可實驗有效的蛋白連接，重復性好。在環氧基表面活化中，免疫磁性微珠不發生團聚和不吸附雜蛋白是應用領域具有高特異性、準確性、可靠性的重要保證，也是本專利產品十分關鍵的技術問題。為了解決這些問題，我們采用合適的活化劑對磁性微球表面進行活化，在活化的同時加入分散劑，阻止活化期間的團聚，選擇合適的緩沖液及其PH值，確保制備出的免疫磁性微珠的直徑在0.5-1μm大小。為了降低非特異性結合，我們則采用一種封閉劑。使用該封閉劑封閉剩余的活化基團，從而充分保證了產品的高特異性。?

本發明的技術方案如下?

1．表面環氧基活化的具有超順磁性微球的合成方法其特征包括以下步驟?

（1）配制金屬離子溶液，（FeCl3·6H2O）和醋酸鈉（NaAc）以1:6-1:10的摩爾比混合成金屬離子溶液，其中鐵離子的濃度為0.01mol/l-0.05mol/l，機械攪拌至完全溶解；?

（2）于200～300℃下進行溶劑熱反應8-16h，得四氧化化三鐵超順磁性微球黑色懸濁液；?

（3）用乙醇和水清洗磁性微球；?

（4）40℃-60℃烘干4-6h得具有超順磁性四氧化三鐵微球，磁?性微球的粒徑為300-500nm；?

（5）將制備所得的超順磁性四氧化三鐵微球于0.1M的HCL中超聲分散30-60min；?

（6）將分散好的微球用純凈水反復洗滌至中性；?

（7）洗滌好的微球分散于乙醇，蒸餾水，氨水(體積比為80：20：1)組成的混合溶液中；?

（8）向上述溶液中加入正硅酸四乙酯（四氧化三鐵與正硅酸四乙酯的摩爾比為10：3）室溫機械攪拌反應6-18h；?

（9）用乙醇和水清洗磁性微球；?

（10）將清洗好的磁性微球加入到由γ―(2,3-環氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷20%，甲醇72%，水8%體積比組成的混合溶液中調節pH4，40℃水浴條件下反應8-16小時；?