[發明專利]一種表面環氧基活化的具有超順磁性微球的合成以及環氧基與蛋白連接的方法

有效

• 申請號: 201310299325.X
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN103386282A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 劉振世;郭翠;夏振偉;劉振華
• 申請（專利權）人: 江陰澤成生物技術有限公司
• 主分類號: B01J13/02
• 分類號: B01J13/02;G01N33/531
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 巴曉艷

1.表面環氧基活化的具有超順磁性微球的制備的方法，其特征在于，實現步驟：

采用水熱合成法制備粒徑為300-500nm的具備超順磁性的四氧化三鐵微球，采用正硅酸四乙酯在氨水的參與下合成核殼式二氧化硅微球,以γ―(2,3-環氧丙氧)?丙基三甲氧基硅烷為硅烷偶聯劑在pH3.5-4.0，35-60℃水浴條件下反應，修飾環氧基，得終產物為表面活性基團為環氧基的的磁性微球。

2.采用表面活性基團為環氧基的磁性微球與蛋白連接的方法，其特征在于，實現步驟：

(1)?環氧基的磁性微球的清洗：用pH7.5-10.0的偶聯緩沖液洗滌分散環氧基活化的具有超順磁性四氧化三鐵微球；

(2)更換蛋白溶液體系：將蛋白溶液體系更換為偶聯緩沖液體系且濃縮至終濃度為5mg/ml-10mg/ml；

(3)連接反應：配制好的蛋白溶液加入到（1）中37℃震蕩反應8-12小時磁性微球表面的環氧基（—CH(O)）和蛋白氨基（NH2-）發生共價反應連接蛋白；

(4)封閉未反應的活性基團：加入(0.1-1.0.mg/ml)的牛血清白蛋白緩沖液封閉未反應的環氧基；

(5)偶聯好蛋白的環氧基磁珠的保存：將連接好蛋白的磁性微球保存于由20%乙醇，0.1%BSA和5‰疊氮鈉組成的緩沖液中4℃保存。

3.根據權利要求1所述，表面環氧基活化的具有超順磁性微球的制備的方法其特征在于采用γ―(2,3-環氧丙氧)?丙基三甲氧基硅烷為硅烷偶聯劑在pH3.5-5.0，35-60℃水浴條件下反應，修飾環氧基。

4.根據權利要求2所述，一種表面活性基團為環氧基的的磁性微球與蛋白連接的方法其特征在于采用pH7.5-10.0的偶聯緩沖液環境（含十二水磷酸氫二鈉1M，乙二胺四乙酸0.1M的混合溶液0.22um水系濾膜過濾后，120℃??20min高壓滅菌，）37℃，進行磁性微球表面的環氧基（—CH(O)）和蛋白氨基（NH2-）發生共價反應連接。

5.根據權利要求書2所述的一種采用表面活性基團為環氧基的磁性微球與蛋白質偶聯的方法，其特征在于，所述的磁性微球偶聯檢測方法為酶聯免疫吸附試驗（ELISA）或化學發光酶免疫檢測法（CLIA）。