[發明專利]抗逆楊樹的分子標記、篩選方法、試劑盒及應用

有效

• 申請號: 201310298867.5
• 申請日: 2013-07-16
• 公開（公告）號: CN104293775A
• 公開（公告）日: 2015-01-21
• 發明（設計）人: 張德強;次東;宋躍朋;田敏;周大凌
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 吳貴明;張永明

1.一種篩選抗逆楊樹的分子標記，其特征在于，所述分子標記為采用MSAP法檢測的分子標記，所述分子標記包括堿基序列為SEQ?ID?NO.1的MS1，SEQ?ID?NO.2的MS2，SEQ?ID?NO.3的MS3，SEQ?ID?NO.4的MS4，SEQ?ID?NO.5的MS5，SEQ?ID?NO.6的MS6，SEQ?ID?NO.7的MS7，SEQ?ID?NO.8的MS8，SEQ?ID?NO.9的MS9，SEQ?ID?NO.10的MS10。

2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，待篩選楊樹中能夠檢測到所述分子標記的植株的抗逆性強于檢測不到所述分子標記的植株。

3.一種篩選抗逆楊樹的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，提取待篩選毛白楊的基因組DNA；

S2，采用MSAP法測定所述待篩選毛白楊的基因組DNA中是否含有堿基序列為SEQ?ID?NO.1的MS1，SEQ?ID?NO.2的MS2，SEQ?ID?NO.3的MS3，SEQ?ID?NO.4的MS4，SEQ?ID?NO.5的MS5，SEQ?ID?NO.6的MS6，SEQ?ID?NO.7的MS7，SEQ?ID?NO.8的MS8，SEQ?ID?NO.9的MS9，SEQ?ID?NO.10的MS10的分子標記；

S3，根據所述步驟S2中的測定結果判斷所述待篩選毛白楊的抗逆性。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，待篩選楊樹中能夠檢測到所述分子標記的植株的抗逆性強于檢測不到所述分子標記的植株。

5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，MSAP法所用的EcoRI接頭的序列為SEQ?ID?NO：11和SEQ?ID?NO：12，HpaII/MspI接頭的序列為SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：14，EcoRI預擴增引物的序列為SEQ?ID?NO：15，HpaII/MspI預擴增引物的序列為SEQ?ID?NO：16，篩選引物序列為SEQ?ID?NO：17～20。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述S2中進行MSAP法測定時的雙酶切連接反應體系的總體積為20μl，包括所述基因組DNA200ng，Hpa?II/Msp?I7.5U，EcoR?I7.5U，10×緩沖液2μl，50pmol的HpaII/MspI接頭和5pmol?EcoR?I接頭，T4DNA連接酶2.5U，加ddH₂O至20μl，37℃保溫12h。

7.一種篩選抗逆楊樹的試劑盒，其特征在于，包括采用MSAP法檢測權利要求1中所述的分子標記時的EcoRI接頭的序列為SEQ?ID?NO：11和SEQ?ID?NO：12，HpaII/MspI接頭的序列為SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：14，EcoRI預擴增引物的序列為SEQ?ID?NO：15，HpaII/MspI預擴增引物的序列為SEQ?ID?NO：16，篩選引物序列為SEQ?ID?NO：17～20。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，進一步包括PCR擴增試劑，所述擴增試劑包括PCR擴增緩沖液，25mmoll^-1MgCl₂，10mmoll^-1dNTP，Taq?DNA聚合酶和雙蒸水。

9.堿基序列為SEQ?ID?NO.1的MS1，SEQ?ID?NO.2的MS2，SEQ?ID?NO.3的MS3，SEQ?ID?NO.4的MS4，SEQ?ID?NO.5的MS5，SEQ?ID?NO.6的MS6，SEQ?ID?NO.7的MS7，SEQ?ID?NO.8的MS8，SEQ?ID?NO.9的MS9，SEQ?ID?NO.10的MS10的MSAP分子標記在楊樹分子標記輔助選擇育種中的應用。