[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定的復(fù)合輔酶制劑、其制備方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310298764.9
• 申請日: 2013-07-17
• 公開（公告）號: CN103341155A
• 公開（公告）日: 2013-10-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳彥卓;楊仲璠;賈東晨;牛罡;劉成東;倪娜;許可;劉曉航;徐明波
• 申請（專利權(quán)）人: 北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司;北京雙鷺立生醫(yī)藥科技有限公司;北京雙鷺生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: A61K38/06
• 分類號: A61K38/06;A61K47/26;A61K47/18;A61K9/19;A61P9/00;A61P1/00;A61K31/7076;A61K31/7084
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1.一種穩(wěn)定的復(fù)合輔酶凍干制劑，其主要組成成分包括：輔酶A(CoA)、輔酶I(NAD)、谷胱甘肽(GSH)、三磷酸腺苷(ATP)、黃素單核苷酸(FMN)、黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)、腺苷蛋氨酸(SAM)、葡萄糖酸鈣及鹽酸半胱氨酸、甘露醇。

2.如權(quán)利要求1所述復(fù)合輔酶制劑，用水溶解后，當(dāng)輔酶A(CoA)濃度為90-120單位/ml時，優(yōu)選其他組分含量配比為輔酶I(NAD)0.1-0.3mg/ml、谷胱甘肽(GSH)1-5mg/ml、三磷酸腺苷(ATP)1-2.5mg/ml、黃素單核苷酸(FMN)1.8-12μg/ml、黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)3-13μg/ml、二磷酸腺苷(ADP)0.1-0.4mg/ml、一磷酸腺苷(AMP)0.2-0.4mg/ml、腺苷蛋氨酸(SAM)1.2-15μg/ml、葡萄糖酸鈣1-5mg/ml、鹽酸半胱氨酸0.5-1.5mg/ml、甘露醇0.6-5mg/ml。

3.一種如權(quán)利要求1、2所述穩(wěn)定的復(fù)合輔酶制劑的制備方法，主要包括以下步驟：

1)取冰凍新鮮酵母菌，加入純水?dāng)嚢杌靹颍焕脺夭罘ㄟM(jìn)行菌體破壁(高溫為90-97℃，冷卻溫度為20℃以下)；充分破壁后2810-5120G離心，4-10℃，離心20分鐘，收取粗提上清液；

2)取與粗提液上清等體積的活性炭裝柱，用純水沖洗平衡柱體；粗提液上清液調(diào)pH值至5-5.5上柱，用乙醇氨洗脫，收集液洗脫；

3)將步驟2)洗脫液蒸發(fā)濃縮，將濃縮液調(diào)至pH值7.0，用2-5倍純水稀釋后上陰離子交換柱，用20mM?pH8.0磷酸鹽緩沖液洗脫并收集洗脫樣品；

4)將步驟3)洗脫樣品用截留分子量為5000道爾頓超濾器超濾，以潔凈容器接取濾過液；

5)在步驟4)所得濾過液中，加水稀釋，稀釋后每毫升含有輔酶A(CoA)90-120U、輔酶I(NAD)0.1-0.3mg/ml、谷胱甘肽(GSH)1-5mg/ml、三磷酸腺苷(ATP)1-2.5mg/ml、黃素單核苷酸(FMN)1.8-12μg/ml、黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)3-13μg/ml、二磷酸腺苷(ADP)0.1-0.4mg/ml、一磷酸腺苷(AMP)0.2-0.4mg/ml、腺苷蛋氨酸(SAM)1.2-15μg/ml；

6)在步驟5)的稀釋液中加入下列物質(zhì)，并使其終濃度為：葡萄糖酸鈣1-5mg/ml、鹽酸半胱氨酸0.5-1.5mg/ml、甘露醇0.6-5mg/ml配制成中間品；中間品用分子量5000道爾頓的超濾器超濾，收集濾出液；

7)將步驟6)收集的濾出液經(jīng)除菌、灌裝；

8)灌裝結(jié)束后，對產(chǎn)品進(jìn)行常規(guī)預(yù)凍，達(dá)到要求后進(jìn)行一次干燥、二次干燥，壓塞，獲得藥學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的凍干制劑產(chǎn)物。

4.如權(quán)利要求3所述制備方法，其凍干過程特征及參數(shù)如下：

1)預(yù)凍時，導(dǎo)液溫度設(shè)定為-46--50℃，導(dǎo)液達(dá)到-46℃以下保持2-4小時后開始降冷阱；冷阱溫度低于-45℃時開始抽真空，一次干燥，導(dǎo)液溫度設(shè)定為-20℃，然后導(dǎo)液溫度以4-7℃/小時升溫，真空度設(shè)定為0.17±0.01mbar，真空度控制范圍為≤0.20mbar或≤5.10V；二次干燥，導(dǎo)液溫度設(shè)定為39-41℃到溫后保持5-8小時，真空度設(shè)定為0.09±0.02mbar，真空度控制范圍為≤0.14mbar或≤4.80V；

2)凍干后壓蓋，送檢獲得藥學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的復(fù)合輔酶凍干制劑產(chǎn)品。

5.如權(quán)利要求1-4所述制劑及其制備方法在制備用于治療心腦血管病和消化系統(tǒng)疾病的藥品的實踐中的應(yīng)用。