[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于固相提取技術(shù)的銀杏葉制劑分析樣品快速制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310298598.2
• 申請(qǐng)日: 2013-07-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103323558A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-09-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李萍;齊煉文;秦勇;王琦;成小蘭;劉新光
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇神龍藥業(yè)有限公司;中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/06
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/06;G01N30/14
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多種銀杏葉制劑中有效成分的快速提取制備方法，屬于中藥制劑分析領(lǐng)域。

技術(shù)背景

銀杏葉制劑是目前治療心腦血管疾病有效且常用的天然藥物。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，全球市場(chǎng)銀杏葉制品的年銷(xiāo)售額高達(dá)550億元，我國(guó)銀杏葉制劑年銷(xiāo)售額從2000年的6億元發(fā)展到2012年的120億元，目前已成為心腦血管系統(tǒng)植物藥領(lǐng)先品種，我國(guó)目前已批準(zhǔn)不同規(guī)格的銀杏制劑100余個(gè)，相關(guān)制劑在我國(guó)應(yīng)用廣泛。

銀杏葉制劑在中、美、歐等國(guó)藥典中均有收載。中國(guó)、美國(guó)、歐洲藥典標(biāo)準(zhǔn)將黃酮類(lèi)和內(nèi)酯類(lèi)成分分別測(cè)定，其中黃酮類(lèi)成分均以酸水解黃酮醇苷后測(cè)定總黃酮苷元含量，并折算成總黃酮醇苷含量，酸水解后測(cè)定黃酮苷元的含量?jī)H能反應(yīng)黃酮類(lèi)成分的總量，難以體現(xiàn)不同成分間的差異。內(nèi)酯類(lèi)成分均通過(guò)超聲提取、乙酸乙酯提取后蒸干和甲醇復(fù)溶等步驟處理后進(jìn)行檢測(cè)，大量輔料的存在使樣品制備過(guò)程更為繁瑣，樣品制備方法耗時(shí)費(fèi)力，在生產(chǎn)中使用難以及時(shí)獲得準(zhǔn)確的樣品質(zhì)量信息，影響了生產(chǎn)效率，同時(shí)使用過(guò)多的有機(jī)試劑也造成一定程度的污染。建立一種更加有效、快速的分析樣品制備方法，對(duì)于快速分析銀杏葉制劑的質(zhì)量具有重要意義。

基質(zhì)分散固相提取(MSPD，matrix?solid-phase?dispersion)是美國(guó)Louisiana州立大學(xué)的Barker教授在1989年提出并給予理論解釋的一種快速樣品處理技術(shù)。其原理是將涂漬有多種聚合物的載體固相提取材料與樣品一起研磨，得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料裝柱，然后用不同的溶劑淋洗柱子，將各種待測(cè)物洗脫下來(lái)。其優(yōu)點(diǎn)是濃縮了傳統(tǒng)的樣品前處理中的樣品勻化、提取、凈化等過(guò)程，不需要進(jìn)行反復(fù)提取、濃縮、定容等操作步驟，避免了樣品制備過(guò)程中的損失。MSPD適用于藥物的殘留分析，它是一種簡(jiǎn)單高效實(shí)際的提取凈化方法，適用于各種分子結(jié)構(gòu)和極性農(nóng)藥殘留的提取凈化，提高了分析速度、減少了試劑用量、適于自動(dòng)化分析。目前該方法常用于藥品雜質(zhì)分析、農(nóng)藥殘留檢測(cè)和重金屬分析等實(shí)驗(yàn)的樣品前處理中，在中藥制劑成分分析中應(yīng)用較少。

HPLC-DAD-ELSD聯(lián)用技術(shù)可快速同步檢測(cè)有無(wú)紫外吸收的化學(xué)成分，近年來(lái)在我國(guó)應(yīng)用較為成熟，各大科研院所與高校發(fā)表過(guò)大量相關(guān)文獻(xiàn)，其穩(wěn)定性好、應(yīng)用性強(qiáng)的特點(diǎn)使其成為公認(rèn)的中藥研發(fā)的常規(guī)設(shè)備。該方法已在2010版《中國(guó)藥典》中使用，經(jīng)驗(yàn)證該方法具有良好的實(shí)用性，具備推廣的通用性與普適性。

目前銀杏制劑在生產(chǎn)中主要采用傳統(tǒng)的熱回流提取法提取樣品，并分別進(jìn)行黃酮和內(nèi)酯的含量測(cè)定，如果能建立一種分析用樣品的快速制備方法，簡(jiǎn)化樣品提取步驟，減少樣品提取時(shí)有機(jī)試劑使用，實(shí)現(xiàn)黃酮和內(nèi)酯同步定量分析，可幫助企業(yè)生產(chǎn)時(shí)快速及時(shí)監(jiān)控產(chǎn)品生產(chǎn)全過(guò)程質(zhì)量，可及時(shí)發(fā)現(xiàn)質(zhì)量有問(wèn)題的樣品進(jìn)一步加工，提高生產(chǎn)效率，降低生產(chǎn)成本。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種基于固相提取技術(shù)的銀杏葉制劑中有效成分的快速提取制備方法，解決了傳統(tǒng)分析樣品制備方法提取時(shí)間長(zhǎng)、溶劑用量大、有效成分制備過(guò)程損失多、不能及時(shí)反映待測(cè)樣品質(zhì)量等問(wèn)題。該方法具有高效、快速、操作簡(jiǎn)便、有機(jī)溶劑消耗少、且集提取、凈化、分離一步完成，最大程度的避免了樣品的損失。

本發(fā)明通過(guò)基質(zhì)固相分散提取法針對(duì)部分市售銀杏葉制劑進(jìn)行樣品前處理，選擇制劑中的黃酮和內(nèi)酯作為方法考察指標(biāo)，與常規(guī)樣品處理方法進(jìn)行比較。所述化合物分別為：Quercetin3-O-2，6-dirhamnosylglucoside、Kaempferol?3-O-2″，6″-dirhamnosylglucoside、Quercetin?3-O-rutinoside、Kaempferol?3-O-rutinoside、lsorhamnetin?3-O-rutinoside、Quercetin?3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnosid、Kaempferol?3-O-2″-glucosylrhamnoside、Kaempferol?3-O-2″-(6″-p-coumaroyl)glucosylrhamnoside、Quercetin、Kaempferol、Isorhamnetin、Ginkgolide?A、Ginkgolide?B、Ginkgolide?C、Ginkgolide?J、Bilobalide。

本發(fā)明方法包含以下步驟：