[發明專利]一種用于高效生產海藻糖的基因工程菌

有效

• 申請號: 201310296116.X
• 申請日: 2013-07-15
• 公開（公告）號: CN103468624A
• 公開（公告）日: 2013-12-25
• 發明（設計）人: 陶榮盛;原犇犇;朱傅赟;沈青;楊晟;蔣宇
• 申請（專利權）人: 上海工業生物技術研發中心;中國科學院上海生命科學研究院湖州工業生物技術中心
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12P19/24;C12P19/14;C12P19/12;C12R1/19
• 代理公司: 上海華工專利事務所 31104
• 代理人: 應云平

1.一種用于高效生產海藻糖的基因工程菌，其特征在于，保藏號為CCTCCNO：M2013237。

2.如權利要求1所述的基因工程菌的應用，其特征在于，用于生產海藻糖。

3.一種高效生產海藻糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

A）將權利要求1中所述的基因工程菌進行發酵培養，收集菌體細胞；

B）破碎菌體細胞，釋放出MTSase和MTHase，得到包含這兩種酶的水溶液；

C）將包含上述兩種酶的水溶液用于將直鏈淀粉或直鏈糊精轉化為海藻糖。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟A）包括：

a、種子培養

將權利要求1中所述的基因工程菌接種至種子培養基，30～37℃振蕩培養3～12小時，待種子培養基OD600=0.5～2時，按照0.5～5%的比例接種至發酵培養基；

b、發酵培養

先在35～37℃振蕩培養2～12小時，然后加入終濃度50～500μM的異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷，再于22～30℃繼續振蕩培養15～24小時，收集菌體細胞。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述種子培養基的組成如下：蛋白胨5～10g/L，酵母粉5～10g/L，氯化鈉2～10g/L。

6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基包括氮源、碳源、無機鹽，所述氮源包括酵母浸膏、酵母提取物、酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、銨鹽、硝酸鹽，所述碳源包括葡萄糖、甘油、淀粉糖漿、玉米漿，所述無機鹽包括氯化鈉、磷酸鹽、硫酸鎂以及錳、鋅、鐵、銅元素的鹽類。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述發酵培養基的組成如下：蛋白胨12g/L，酵母粉24g/L，三水磷酸氫二鉀16.7g/L，磷酸二氫鉀2.31g/L，甘油5g/L。

8.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟B）中所述破碎菌體的方法包括：超聲波處理、反復凍融、加壓減壓處理、表面活性劑或酶處理。

9.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟C）包括：配制濃度為10～30%的直鏈淀粉或直鏈糊精溶液，加入步驟B）中得到的包含MTSase和MTHase的水溶液，維持溫度30～50℃，pH6.0～8.0，當生成的海藻糖濃度達到要求時，加入糖化酶處理，最終得到海藻糖的溶液。