[發明專利]一種用于檢測P24抗原的碳量子點試紙條的制備方法有效
| 申請號： | 201310295487.6 | 申請日： | 2013-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN103344756A | 公開（公告）日： | 2013-10-09 |
| 發明（設計）人： | 胡敏;潘藝;梁好 | 申請（專利權）人： | 中南大學湘雅二醫院 |
| 主分類號： | G01N33/558 | 分類號： | G01N33/558 |
| 代理公司： | 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259 | 代理人： | 姚迎新 |
| 地址： | 410000 湖南*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 檢測 p24 抗原 量子 試紙 制備 方法 | ||
1.一種用于檢測P24抗原的碳量子點試紙條的制備方法，包括在底板兩端分別粘結樣品墊和吸水墊的步驟，其特征在于：還包括以下步驟：
（1）P24碳量子點墊的制取和P24硝酸纖維素膜的制備；
（2）在所述底板上依次相互搭接地粘結所述樣品墊、P24碳量子點墊、P24硝酸纖維素膜和吸水墊，得到試紙板；
（3）將試紙板切割成若干條符合規定寬度的試紙條，并將試紙條密封保存。
2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：上述（1）中的P24碳量子點墊的制取按以下步驟進行：
1）制備、純化碳量子點溶液，其步驟如下：
a、用三口搖瓶收集碳灰與硝酸溶液，并混勻；
b、將上述混勻的溶液在100℃磁力攪拌下回流12h，再以3000rpm?、4℃離心10?min，分離未反應的碳灰；
c、收集上述溶液中清亮的棕黃色上清液，棄去沉淀；
d、加入3倍上述上清液體積的丙酮溶液，以14000rpm離心10?min，棄去上清液，收集沉淀；
e、將上述收集的沉淀干燥后，溶于去離子水中，用碳酸鈉溶液調節pH至7.0；
f、將調節pH值后的溶液于4℃、12000rpm離心30min，收集上清液；
g、將f中收集的上清液加入到透析袋中透析48h，去除雜質，得到純化的水溶性碳量子點溶液；
2）利用上述碳量子點溶液制取P24碳量子點偶聯抗體，其步驟如下：
h、將P24抗體加入EDC和NHS混合溶液中，室溫反應30min；
i、向上述混合溶液中加入巰基乙醇，淬滅未反應的EDC；
j、加入等體積的g中純化的水溶性碳量子點溶液，室溫下反應2h；
k、接著加入BSA溶液與NH4Cl溶液，室溫放置10min；
n、最后用PBS透析除去未偶聯的抗體及游離NHS，得到P24碳量子點偶聯抗體；
3）將玻璃纖維膜放入含有蔗糖、BSA、吐溫的磷酸緩沖液中浸透，取出干燥后放入上述制取的P24碳量子點偶聯抗體中浸泡10?min，再取出晾干，得到P24碳量子點墊；
4）待上述P24碳量子點墊干燥后，4℃保存。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于：上述（1）中P24硝酸纖維素膜制備是在硝酸纖維素膜上均勻地噴上分別針對Test區和Control區的P24抗體和羊抗鼠IgG，室溫下干燥后用適當濃度的BSA溶液進行封閉，然后用Na2HPO4洗滌液漂洗三次，室溫下充分干燥后，4℃保存。
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