[發明專利]提高截短側耳素產量的方法

有效

• 申請號: 201310294509.7
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN104278044B
• 公開（公告）日: 2017-10-13
• 發明（設計）人: 李平作;王莉;郅曉樂;葉晴;趙國屏
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/63;C07C69/675
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 祝蓮君,劉真真

技術領域

本領域涉及生物技術領域，具體地，涉及了一種提高截短側耳素(Pleuromutilin)產量的方法。

背景技術

截短側耳素是化學合成泰妙菌素(Tiamulin)的前體，分子式為C₂₂H₃₄O₅，分子量為378.51，屬二萜類化合物，是高等真菌擔子菌側耳屬(Pleurotus mutilus)或其它真菌的次級代謝產物，是一種天然的具有廣泛抗菌活性的二萜類化合物。

雖然我國截短側耳素的產能大，雖然本領域已經有利用不同的生物體來生產截短側耳素的技術，然而生產菌株的效價水平較低，增加了生產的成本。這大大限制了截短側耳素的應用。

綜上所述，本領域迫切需要開發有效的提高截短側耳素產量的方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種有效的提高截短側耳素產量的方法。

本發明提供了通過輔酶因子再生從而提高截短側耳素產量的方法。

在本發明的第一方面提供了一種雙酶偶聯的構建物，所述構建物包括：

(a)用于生產外源酮基還原酶(KR)的第一亞構建物，

其中所述的第一亞構建物包括第一啟動子、與所述第一啟動子可操作地連接的酮基還原酶的編碼序列、和終止密碼子；

(b)用于生產外源葡萄糖脫氫酶(GDH)的第二亞構建物，

其中所述的第二亞構建物包括第二啟動子、與所述第二啟動子可操作地連接的酮基還原酶的編碼序列、和終止密碼子，

其中所述的第一亞構建物和第二亞構建物是相互獨立的、或是一體的。

在另一優選例中，所述的酮基還原酶(KR)來源于來源于釀酒酵母、黑曲霉、紫杉、雙孢蘑菇、或腸膜明串珠菌。

更佳地，所述的酮基還原酶選自下組：

來源于釀酒酵母的HMGR(Y)；

來源于黑曲霉的HMGR(A)；

來源于紫杉的HMGR(T)；

來源于雙孢蘑菇的HMGR(B)；

來源于腸膜明串珠菌亞種J18(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides Strain J18)的HMGR(L)。

在另一優選例中，所述的葡萄糖脫氫酶(GDH)來源于枯草芽孢桿菌、巨大枯草芽孢桿菌的葡萄糖脫氫酶、釀酒酵母、黑曲霉、紫杉。

更佳地，所述的葡萄糖脫氫酶(GDH)選自下組：

來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))；

來源于巨大枯草芽孢桿菌的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(M))；

來源于釀酒酵母的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(Y))；

來源于黑曲霉的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(A)；

來源于紫杉的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(T)。

在另一優選例中，所述的酮基還原酶(KR)和葡萄糖脫氫酶(GDH)選自下列組合：

來源于釀酒酵母的HMGR(Y)與來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))組合成的HMGR(Y)-GDH(B)偶聯組合；

來源于黑曲霉的HMGR(A)與來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))組合成的HMGR(A)-GDH(B)偶聯組合；

來源于紫杉的HMGR(T)與來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))組合成的HMGR(T)-GDH(B)偶聯組合；

來源于雙孢蘑菇的HMGR(B)與來源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH(B))組合成的HMGR(B)-GDH(B)偶聯組合；