[發(fā)明專利]提高截短側(cè)耳素產(chǎn)量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201310294509.7
• 申請(qǐng)日: 2013-07-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104278044B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李平作;王莉;郅曉樂(lè);葉晴;趙國(guó)屏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/53
• 分類號(hào): C12N15/53;C12N15/63;C07C69/675
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司31266
• 代理人: 祝蓮君,劉真真

1.一種基因工程細(xì)胞，其特征在于，所述細(xì)胞的基因組中整合有構(gòu)建物；或者所述細(xì)胞的基因組中整合有(a)用于表達(dá)外源酮基還原酶(KR)的第一表達(dá)盒和(b)用于表達(dá)外源葡萄糖脫氫酶(GDH)的第二表達(dá)盒，

其中所述的第一表達(dá)盒包括第一啟動(dòng)子、與所述第一啟動(dòng)子可操作地連接的酮基還原酶的編碼序列、和終止密碼子；

所述的第二表達(dá)盒包括第二啟動(dòng)子、與所述第二啟動(dòng)子可操作地連接的葡萄糖脫氫酶(GDH)的編碼序列、和終止密碼子，并且所述的細(xì)胞是生產(chǎn)截短側(cè)耳素的工程菌，所述構(gòu)建物包括：

(a)用于生產(chǎn)外源酮基還原酶(KR)的第一亞構(gòu)建物，

其中所述的第一亞構(gòu)建物包括第一啟動(dòng)子、與所述第一啟動(dòng)子可操作地連接的酮基還原酶的編碼序列、和終止密碼子；

(b)用于生產(chǎn)外源葡萄糖脫氫酶(GDH)的第二亞構(gòu)建物，

其中所述的第二亞構(gòu)建物包括第二啟動(dòng)子、與所述第二啟動(dòng)子可操作地連接的葡萄糖脫氫酶(GDH)的編碼序列、和終止密碼子，

其中所述的第一亞構(gòu)建物和第二亞構(gòu)建物是相互獨(dú)立的、或是一體的；

其中，所述的酮基還原酶選自下組：來(lái)源于釀酒酵母的戊二酰單酰輔酶A還原酶(HMGR)；來(lái)源于黑曲霉的戊二酰單酰輔酶A還原酶(HMGR)；來(lái)源于紫杉的戊二酰單酰輔酶A還原酶(HMGR)；來(lái)源于雙孢蘑菇的戊二酰單酰輔酶A還原酶(HMGR)；來(lái)源于腸膜明串珠菌亞種J18(Leuconostoc mesenteroides subsp.mesenteroides Strain J18)的戊二酰單酰輔酶A還原酶(HMGR)。

2.如權(quán)利要求1所述的基因工程細(xì)胞，其特征在于，所述的葡萄糖脫氫酶(GDH)來(lái)源于枯草芽孢桿菌、巨大枯草芽孢桿菌的葡萄糖脫氫酶、釀酒酵母、黑曲霉、紫杉。

3.如權(quán)利要求1或2所述的基因工程細(xì)胞，所述的葡萄糖脫氫酶(GDH)選自下組：

來(lái)源于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH)；

來(lái)源于巨大枯草芽孢桿菌的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH)；

來(lái)源于釀酒酵母的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH)；

來(lái)源于黑曲霉的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH)；

來(lái)源于紫杉的葡萄糖脫氫酶(Glucose Dehydrogenase GDH)。