[發(fā)明專利]針對人抗苗勒激素II型受體的單克隆抗體及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310294305.3
• 申請日: 2007-10-31
• 公開（公告）號: CN103396491A
• 公開（公告）日: 2013-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: I·特隆;A·佩萊格蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 法國國家健康醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12P21/02;C12P21/08;A61K39/395;A61K48/00;A61K45/00;A61K47/48;A61P35/00;G01N33/577;G01N33/574
• 代理公司: 北京潤平知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11283
• 代理人: 李婉婉;王崇

本申請是申請?zhí)枮?00780048964.1、申請日為2007年10月31日、名稱為“針對人抗苗勒激素Ⅱ型受體（AMHR-Ⅱ）的單克隆抗體”的中國申請的分案申請。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及直接針對人抗苗勒激素II型受體（AMHR-II）的單克隆抗體及其片段以及它們在治療和診斷癌癥（如卵巢癌）中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

卵巢癌是婦科惡性腫瘤的重要原因，是婦女癌癥相關(guān)死亡的第五大主要原因。平均發(fā)病率為每100000人中約10人，全歐洲共有1-2％的婦女在某個年齡階段發(fā)生卵巢癌（Black?RJ?et?al.1997）。

顆粒細(xì)胞腫瘤(GCT)約占卵巢惡性瘤的5％，占卵巢性索間質(zhì)瘤（ovarian?sex?cord-stromal?tumours）的70％。盡管在疾病最初幾年中它們的惡化可能性相對較低，但可能在手術(shù)切除原發(fā)瘤后直到30年才出現(xiàn)復(fù)發(fā)(Singh-Ranger?G?et?al.2004)。如果早期作出診斷，在腫瘤擴(kuò)散出腹膜之前，通過手術(shù)徹底切除可明顯地改善預(yù)后復(fù)發(fā)（Dutertre?M.et?al.,2001）。

上皮卵巢癌約占所有卵巢腫瘤的80％。若在早期診斷出這類癌，存活率約為90％。不幸的是，在診斷中，大約75％的婦女普遍發(fā)生腹內(nèi)疾病擴(kuò)散（美國癌癥學(xué)會的實例和圖片。2001www.cancer.org）。在這些病例中，通過適當(dāng)治療，存活率約為20-25％（Rapkiewicz?AV.et?al.2004）。

提出了針對上皮卵巢癌的一些分子標(biāo)記，尤其是循環(huán)形式的癌抗原125（CA125或MUC16），它在約80％的這類腫瘤中過度表達(dá)。但是它的進(jìn)化水平與月經(jīng)和良性條件（如子宮內(nèi)膜異位癥或肝病）相關(guān)。

用于上皮卵巢癌的主要治療策略是外科手術(shù)和化學(xué)療法。例如，通常以順鉑類化學(xué)療法治療卵巢癌，但由于獲得的順鉑抗性而使其經(jīng)常復(fù)發(fā)（Yahata,H.et?al.,2002）。盡管大部分患者一開始能對鉑和紫杉醇化學(xué)療法作出反應(yīng)，包括完全緩解，但復(fù)發(fā)率約為85％（Gordon?AN?et?al.2004）。基于激素、抗生成血管因子和單克隆抗體的新靶向療法已經(jīng)快速發(fā)展起來。單克隆抗體包括奧戈伏單抗（oregovomab）（OvaRex,AltaRex），該奧戈伏單抗是一種直接針對CA125的研究型鼠單克隆抗體，目前被用于免疫治療的臨床試驗（Berek?JS?et?al.2004）；和西妥昔單抗（cetuximab），該西妥昔單抗是直接針對表皮生長因子受體(EGFR)的，在30-70％的上皮卵巢癌中有表達(dá)(Ozols?RF?et?al.2004)。

因而，對用于治療卵巢癌的新治療劑存在大量的需求。此外，明確需要對作為用于診斷活體受試者卵巢癌的靈敏的和特異性的生物標(biāo)記的新卵巢癌相關(guān)蛋白進(jìn)行識別。

抗苗勒激素II型受體參與了與男性生殖系統(tǒng)的發(fā)育相關(guān)的苗勒膽管的退化。該受體在人上皮卵巢癌細(xì)胞中頻繁表達(dá)。對于已經(jīng)證實的AMH抑制卵巢癌細(xì)胞生長的能力，AMHR-II可構(gòu)成有價值的靶點以用在基于抗體的免疫療法中。

通過小鼠種系的遺傳操作，研究了動物模型中的AMHR-II表達(dá)。Dutertre等(2001)報導(dǎo)了功能型AMHR-II在顆粒細(xì)胞卵巢腫瘤中的表達(dá)，所述顆粒細(xì)胞卵巢腫瘤源于使用AMH啟動子SV40癌基因構(gòu)建體通過定向致癌基因而獲得的轉(zhuǎn)基因小鼠。在新近研發(fā)的小鼠模型中，Conolly等(2003)使用相同的癌基因構(gòu)建體，在控制AMHR-II5’上游調(diào)控序列的情況下，證實了約50％的雌小鼠發(fā)生了上皮卵巢癌。Masiakos等(1999)也證實了在人上皮卵巢癌細(xì)胞株中以及從卵巢癌患者和形成固體腫瘤的患者中分離出的腹水細(xì)胞（ascite?cells）樣品中表達(dá)有AMHR-II。這些研究者還報導(dǎo)了在源于其它組織（如乳腺（Segev?DL?et?al;2000）或前列腺（Segev?DL?et?al.2002））的癌細(xì)胞株中表達(dá)有AMHR-II。這些數(shù)據(jù)表明了在人類癌癥，尤其在卵巢腫瘤中AMHR-II具有非常特異性的分布。

2004年，Salhi等開發(fā)并表征了直接針對人AMHR-II的單克隆抗體(mAb)，并采用免疫組織化學(xué)(IHC)通過人顆粒細(xì)胞腫瘤(GCTs)和人睪丸中的塞爾托利（Sertoli）和萊迪希（Leydig）細(xì)胞，證實了AMHR-II的強(qiáng)表達(dá)。他們還清楚地顯示了mAb12G4在高水平表達(dá)有天然配體(AMH)的顆粒細(xì)胞中的非競爭性結(jié)合，從而實現(xiàn)mAb12G4在表達(dá)有AMHR-II的腫瘤中的體內(nèi)應(yīng)用。