[發明專利]一種懷山藥抗氧化多肽及其制備方法

無效

• 申請號: 201310294168.3
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103352065A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 汪江波;饒鋮樂;曹敬華;蔡鳳嬌
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16;C07K1/14
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

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技術領域

????本發明屬于生物技術領域，涉及一種懷山藥抗氧化多肽及其制備方法。

背景技術

生物分子的氧化是一個自由基介導的過程，它會對食品和生物系統造成許多不利的影響。因此，尋找安全的抗氧化劑以抑制抗氧化物的的作用一直是生化營養學的研究熱點。多肽是涉及生物體內多種細胞功能的活性物質。隨著現代蛋白質工程、生物酶工程技術的發展，大量具有特性功能的生物活性肽被發現、開發出來，應用于食品配方、化妝品等領域。多肽的抗氧化作用機制的研究及抗氧化多肽的制備方法研究也日漸成熟。化學合成的抗氧化劑雖然價格便宜、效果好，但目前很多研究者發現化學合成抗氧化劑對人體肝、肺等器官會造成蓄積性致癌作用，從而引起人們對化學合成抗氧化劑的擔憂，并且開始逐漸限制其在食品中的應用。于是人們把目光轉向了天然抗氧化劑，因此，天然抗氧化多肽的制備研究顯得尤為重要。

素有“懷參”之稱的懷山藥產自河南焦作境內，具有極高的藥用及保健價值，是很多保健藥品和功能性食品的主要原料之一。懷山藥中含有豐富的蛋白，將其蛋白提取出來通過蛋白酶酶解成多肽液，再對多肽液進行純化，可得到具有較強抗氧化活性的懷山藥多肽。生物活性肽是人體中極其重要的活性物質，它參與了人體生長發育、新陳代謝、疾病及衰老、死亡的整個過程，并起著至關重要的作用。研究發現，肽與蛋白質相比，具有良好的溶解性、低粘度、抗凝膠形成性，低分子肽不會產生過敏反應等優點。除此之外，還具有眾多的生理活性，如抗氧化、降血壓、降膽固醇、抗疲勞、促進乙醇代謝等活性。

凝膠過濾層析也稱分子篩層析、排阻層析，是利用具有網狀結構的凝膠的分子篩作用，根據被分離物質的分子大小不同來進行分離。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網狀結構物質，多是交聯的聚糖（如葡聚糖或瓊脂糖）類物質，小分子物質能進入其內部，流下時路程較長，而大分子物質卻被排除在外部，下來的路程短，當一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時，溶液中的物質就按不同分子量篩分開了。它是目前多肽最廣泛使用的分離方法之一，也是所有色譜技術中最簡單、條件最溫和的方法。???

發明內容

本發明的首要目的在于提供一種懷山藥抗氧化多肽的制備方法，該方法分離效果好，獲得的多肽純度達90%以上。

本發明的另一目的在于提供通過上述制備方法制備得到的懷山藥抗氧化多肽。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種懷山藥抗氧化多肽的制備方法，包括如下步驟：采用中性蛋白酶對懷山藥進行酶解得到懷山藥粗多肽液，經分離純化、冷凍干燥得到懷山藥抗氧化多肽；所述的分離純化的手段包括脫糖、透析和凝膠層析。

所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，具體包括如下步驟：

（1）懷山藥粗多肽液的制備：稱取懷山藥，加入水打漿；先熱處理，再冷卻至酶解反應溫度，用NaOH溶液調至酶反應所需?pH值，加入中性蛋白酶，反應過程中不斷滴加NaOH溶液，使pH值穩定在酶反應所需?pH值，反應結束后，滅酶，冷卻，離心取上清液，即得到黃褐色的懷山藥粗多肽液YP。

（2）脫糖：用無水乙醇對粗多肽液YP進行脫糖得到脫糖后的多肽液YP???????????????????????????????????????????????。

（3）透析：將多肽液YP用三氯乙酸處理，可除去多肽液中剩余的大部分蛋白，脫除蛋白后，通過1000da透析袋透析，多肽液中小于1000da的小分子氨基酸及離子等均被透析掉，得到較純的混合肽組分YPP。

（4）凝膠層析：用Sephadex?G-50葡聚糖凝膠層析分離混合肽組分YPP，收集最佳抗氧化活性組分的層析洗脫液，再經1000da透析袋透析脫鹽。

（5）冷凍：收集脫鹽后的多肽液，置于-50℃以下超低溫冰箱冷凍24h以上形成冰塊。

（6）干燥：將冷凍冰塊置于真空干燥機中干燥，得到懷山藥抗氧化多肽。

步驟（1）中所述的懷山藥粗多肽液的制備優選為：按20%質量濃度的底物濃度稱取懷山藥，加入蒸餾水打漿；然后在?90℃下熱處理30min，冷卻到45℃后，用0.1mol/L的NaOH溶液調至pH為6，依據所用酶的活力單位加入酶底物比[E]/[S]為1.2-6萬U/g的中性蛋白酶，反應過程中不斷滴加?0.1mol/L的NaOH溶液，使pH值穩定6；反應6h后，沸水浴滅酶?10min，冷卻后10000r/min離心15?min取上清液，即得到黃褐色的懷山藥粗多肽液YP。