[發明專利]一種懷山藥抗氧化多肽及其制備方法

無效

• 申請號: 201310294168.3
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103352065A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 汪江波;饒鋮樂;曹敬華;蔡鳳嬌
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16;C07K1/14
• 代理公司: 武漢科皓知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 張火春

1.一種懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于包括如下步驟：采用中性蛋白酶對懷山藥進行酶解得到懷山藥粗多肽液，經分離純化、冷凍干燥得到懷山藥抗氧化多肽。

2.根據權利要求1所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：所述的分離純化的手段包括脫糖、透析和凝膠層析。

3.根據權利要求1所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于具體包括如下步驟：

（1）懷山藥粗多肽液的制備：稱取懷山藥，加入水打漿；先熱處理，再冷卻至酶解反應溫度，用NaOH溶液調至酶反應所需?pH值，加入中性蛋白酶，反應過程中不斷滴加NaOH溶液，使pH值穩定酶反應所需?pH值，反應結束后，滅酶，冷卻，離心取上清液，即得到懷山藥粗多肽液YP；

（2）脫糖：用無水乙醇對粗多肽液YP進行脫糖得到脫糖后的多肽液YP???????????????????????????????????????????????；

（3）透析：將多肽液YP用三氯乙酸處理，脫除蛋白后，通過1000da透析袋透析，得到混合肽組分YPP；

（4）凝膠層析：用Sephadex?G-50葡聚糖凝膠層析分離混合肽組分YPP，收集最佳抗氧化活性組分的層析洗脫液，再經1000da透析袋透析脫鹽；

（5）冷凍：收集脫鹽后的多肽液，置于-50℃以下超低溫冰箱冷凍24h以上形成冰塊；

（6）干燥：將冷凍冰塊置于真空干燥機中干燥，得到懷山藥抗氧化多肽。

4.根據權利要求3所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：步驟（1）中所述的懷山藥粗多肽液的制備為：按20%質量濃度的底物濃度稱取懷山藥，加入蒸餾水打漿；然后在?90℃下熱處理30min，冷卻到45℃后，用0.1?mol/L的NaOH溶液調至pH為6，依據所用酶的活力單位加入酶底物比為1.2-6萬U/g的中性蛋白酶，反應過程中不斷滴加?0.1?mol/L的NaOH溶液，使pH值穩定6；反應6h后，沸水浴滅酶?10min，冷卻后10000r/min離心15?min取上清液，即得到懷山藥粗多肽液YP。

5.根據權利要求3所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：步驟（2）中所述的脫糖為：按照無水乙醇與粗多肽液YP體積比1:1的比例混合，于搖床170rpm/min搖動1h，8000rpm/min離心15min，取上清液即為脫糖后多肽液YP。

6.根據權利要求3所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：步驟（3）中所述的三氯乙酸為體積濃度15%的三氯乙酸，多肽液YP與體積濃度15%的三氯乙酸的體積比為1:1。

7.根據權利要求3所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：步驟（4）中所述的凝膠層析的條件為：采用的層析柱柱徑為2cm，裝柱高度為45-70cm，進樣量為0.5-1mL，洗脫液為pH?8.0終濃度50mmol/L的三羥甲基氨基甲烷/HCI和終濃度0.lmol/L氯化鈉的混合液，流速3-6mL/10min，在280nm下進行測量。

8.根據權利要求1所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：冷凍、干燥得到懷山藥抗氧化多肽后還包括粉碎過篩和灌裝。

9.根據權利要求8所述的懷山藥抗氧化多肽的制備方法，其特征在于：所述的粉碎過篩為將冷凍、干燥得到的懷山藥多肽經粉碎機粉碎，過100目振動篩；所述的灌裝為將過篩后的懷山藥抗氧化多肽粉進行無菌灌裝，得到懷山藥多肽抗氧化劑。

10.一種懷山藥抗氧化多肽，其特征在于：通過權利要求1-9任一項所述的方法制備得到。