[發(fā)明專利]一種檢測豬外周血和脾臟淋巴細(xì)胞膜表面分子的樣品制備試劑盒及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201310292681.9
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103424294A
• 公開（公告）日: 2013-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇華荔;王安如
• 申請（專利權(quán)）人: 北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司;浙江大北農(nóng)農(nóng)牧科技有限公司;漳州大北農(nóng)農(nóng)牧科技有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N15/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種適用于流式細(xì)胞術(shù)檢測豬外周血和脾臟淋巴細(xì)胞膜表面分子的樣品制備試劑盒，包括緩沖液I、緩沖液II和緩沖液III，所述緩沖液I為含100-800U/ml青霉素，100-800μg/ml鏈霉素，1-8μg/ml兩性霉素B的PBS緩沖液，pH值為7.2-7.4；所述緩沖液II為含2mMEDTA,0.2%-0.6%BSA，100-800U/ml青霉素，100-800μg/ml鏈霉素，1-8μg/ml兩性霉素B的PBS緩沖液，pH值為7.2-7.4；所述緩沖液III為含0.1%NaN₃，1%-5%多聚甲醛的PBS緩沖液，pH值為7.2-7.4。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述緩沖液I為含500U/ml青霉素，5μg/ml鏈霉素，5μg/ml兩性霉素B的PBS緩沖液，pH值為7.2-7.4；所述緩沖液II為含2mM?EDTA,0.5%BSA，500U/ml青霉素，500μg/ml鏈霉素，5μg/ml兩性霉素B的PBS緩沖液，pH值為7.2-7.4；所述緩沖液III為含0.1%NaN₃，2%多聚甲醛的PBS緩沖液，pH值為7.2-7.4。

3.如權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，還包括紅細(xì)胞裂解液，所述紅細(xì)胞裂解液主要成分為：0.16M?NH₄Cl，0.13mMEDTA，12mM?NaHCO₃，pH值為7.2。

4.一種利用權(quán)利要求1～3任一項所述的試劑盒進(jìn)行豬外周血和脾臟淋巴細(xì)胞膜表面抗原流式細(xì)胞術(shù)檢測的樣品制備方法，其包括采集豬外周血和豬脾臟組織，制備淋巴細(xì)胞單細(xì)胞懸液，裂解紅細(xì)胞后用抗體染色進(jìn)行固定，直至用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于：將豬的外周血或脾臟獲取生物樣品并制成細(xì)胞粗提混懸液；將粗提液轉(zhuǎn)入離心管后，加入紅細(xì)胞裂解液經(jīng)冰浴裂解紅細(xì)胞，離心除去上清，收集沉淀細(xì)胞；用緩沖液I重懸細(xì)胞，并計數(shù)細(xì)胞；用緩沖液II重懸細(xì)胞，并加入熒光素標(biāo)記的細(xì)胞膜表面抗體，冰浴30min；再用緩沖液I洗滌細(xì)胞后，將細(xì)胞懸浮于緩沖液III，以備流式細(xì)胞儀的檢測。

6.權(quán)利要求1～3任一項所述的試劑盒在細(xì)胞表面分子檢測中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的細(xì)胞表面分子選自CD3，CD4，CD8，CD25和/或CD69。