[發明專利]一種確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法

無效

• 申請號: 201310291856.4
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103439419A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 鮑艷宇;劉雨霞
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N33/15
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

技術領域

本發明屬于環境分析化學領域，具體涉及一種確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法。?

背景技術

土霉素屬于四環素類抗生素的一種，具有十二氫化并四苯基結構，是由放線菌產生的一種廣譜性抗生素，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、厭氧菌等均具有抗性。?

我國是抗生素使用大國，其中土霉素是生產量和使用量比較高的抗生素之一。據統計，2000年我國僅土霉素產量1萬噸，占世界總產量的65%，參見：胡冠九、王冰、孫成.?高效液相色譜法測定環境水樣中5種四環素類抗生素殘留[J].?環境化學,?2007,?26(1),?106-107。土霉素主要用于畜禽養殖業，然而高達90-95%的土霉素殘留在畜禽糞便中，參見：Beconi-Barker?M?G,?Hornish?R?E,?et?al.?Ceftiofur?hy?drochloride:?plasma?and?tissue?distribution?in?swine?following?in?tramuscular?administration?at?various?doses?[J].?Veterinary?Pharmacology?&?therapeutics,?1996,?19(3),?192-199。隨著畜禽糞便作為廉價肥料用于農田土壤，進而給土壤環境造成嚴重的污染，如在我國，土壤中可檢測到的土霉素含量高達200mg/kg，參見：王冉、劉鐵錚、?王恬.?抗生素在環境中的轉歸及其生態毒性[J].?生態學報,?2006,26(1):265-269。?

近年來，由于土壤中土霉素的污染給土壤生態安全造成了不良的影響，因此對于生長在土霉素污染土壤中的生物對其吸收累積現象得到了廣泛的研究和關注。其中，生物體中土霉素的提取是準確測定土霉素殘留量的關鍵技術，直接決定了最終測定土霉素含量的準確性。由于生物種類存在差異性，因此同一浸提劑并不一定適合對所有生物種類中土霉素的提取。因此有必要對于不同的生物種類選擇最優浸提劑進行提取，并建立簡單、準確有效的浸提方法。GB/T?5009.95-2003中，利用Na₂EDTA-McIlvaine緩沖液對蜂蜜中的土霉素等四環素類抗生素進行提取測定。Boonsaner?和Hawker，參見：Boonsaner?M,?Hawker?D?W.?Accumulation?of?oxytetracycline?and?norfloxacin?from?saline?soil?by?soybeans.?Science?of?the?Total?Environment.?2010,?408:?1731-1737，利用Na₂EDTA-McIlvaine緩沖液提取大豆體內的土霉素，但并未對緩沖液的提取濃度進行解釋和說明。Blackawell等，參見：Blackwell?P?A,?Lutzhoft?H?C?H,?Ma?H?P?et?al.?Fast?and?robust?simultaneous?determination?of?three?veterinary?antibiotics?in?groundwater?and?surface?water?using?a?tandem?solid-phase?extraction?with?high-performance?liquid?chromatography-UV?detection[J].?Journal?of?Chromatography?A,?2004,?1045(1-2),?111-117，研究發現：在超聲輔助萃取下，用Na₂EDTA-McIlvaine緩沖液-甲醇作為浸提劑提取土壤中的土霉素，加標回收率可高達27-75%。Juhel-Gauguin等研究發現，參見：Juhel-Gaugain?M.,?McEvoy?J.?D.?G.,?VanGinkel?L.?A.?Measurements?for?certification?of?chlortetracycline?reference?materials?within?the?European?Union?Standards,?Measuraments?and?Testing?programme[J]?Analytical?Chemistry,?2000,?368(7),?656-663，用EDTA緩沖液-甲醇作為浸提劑對動物組織中的土霉素具有較好的提取效果，加標回收率可達到75%以上。胡獻剛等報道，參見：胡獻剛、羅義、周啟星、徐琳.?2008.?固相萃取-高效液相色譜法測定畜牧糞便中13種抗生素藥物殘留.?分析化學，36（9）：1162-1166，檸檬酸緩沖液酸化的乙腈提取豬糞中土霉素等四環素類抗生素效果比較好。Anne，參見：Anne?Marie?Jacobsen,?Bent?Halling-S?rensen,?Flemming?Ingerslev,?Steen?Honoré?Hansen.?Simultaneous?extraction?of?tetracycline,?macrolide?and?sulfonamide?antibiotics?from?agricultural?soils?using?pressurised?liquid?extraction,?followed?by?solid-phase?extraction?and?liquid?chromatography–tandem?mass?spectrometry.?Journal?of?Chromatography?A,?2004,?1038:?157-170，提出利用甲醇-草酸（體積比1:1）能夠對土壤中的土霉素進行很好的浸提。目前，已經建立了完善的對畜禽肉類中土霉素的提取方法，采用的是國標（GB/T?5009.116-2003）中提出的5%高氯酸浸提法。由于生物種類的差異性，對于土壤、糞便、蜂蜜、蔬菜、畜禽肉類中土霉素進行提取的浸提劑并不一定適合于土壤生物蚯蚓中土霉素的提取，然而到目前為止還未見到關于利用何種浸提劑來提取蚯蚓中土霉素比較合適的研究報道。?