[發明專利]一種確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法

無效

• 申請號: 201310291856.4
• 申請日: 2013-07-12
• 公開（公告）號: CN103439419A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 鮑艷宇;劉雨霞
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N33/15
• 代理公司: 天津佳盟知識產權代理有限公司 12002
• 代理人: 侯力

1.一種確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法，其特征在于包括以下步驟：?

1）將新鮮的蚯蚓樣品置于瓷質研缽中，加入無水Na₂SO₄，在氮氣條件下研磨制備組織漿液，轉移磨碎后的組織漿液，用浸提劑反復清洗研缽至洗凈殘留物，收集全部清洗液并加入浸提劑至所需的體積，得到浸提液，所述浸提劑為具有潛力的各種浸提劑；

2）將上述浸提液在18-25℃、200r/min條件下振蕩20min，然后在100W條件下超聲提取20min，用冷凍離心機在2500rmp、4℃條件下進行高速離心分離25min，收集上清液；

3）將上述上清液過0.45μm聚四氟乙烯濾膜去除雜質，采用高效液相色譜測定土霉素含量；

4）分別計算各種浸提劑對土霉素的加標回收率，選擇提取率在80%以上的浸提劑，在此基礎上，選擇同一浸提劑對土霉素浸提率的重復性差異性較小、浸提比較穩定的浸提劑，從而確定對蚯蚓中土霉素提取比較適合的浸提劑；

5）采用上述確定的浸提劑，分別進行一次浸提和二次浸提，通過方差分析進行比較其浸提效果的差異性，并進一步對其浸提穩定性進行檢測，在一次浸提和二次浸提總量之間不呈現顯著差異的基礎上，選擇一次浸提對土霉素進行浸提，從而簡化提取次數，提高提取效率。

2.根據權利要求1所述確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法，其特征在于：所述具有潛力的各種浸提劑包括pH為4.7的檸檬酸酸化乙腈、0.1?mol/L?pH4.0±0.05的Na₂EDTA-McIlvaine、濃度為5w%的高氯酸、體積比為1:1的甲醇與檸檬酸的混合液、體積比為1:1的甲醇與EDTA緩沖液的混合液和不同體積比的甲醇與水的混合液。

3.根據權利要求1所述確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法，其特征在于：所述蚯蚓樣品與無水NaSO₄的質量比為3：1。

4.根據權利要求1所述確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法，其特征在于：所述蚯蚓樣品與浸提液的用量比為1.50g/20mL。

5.根據權利要求1所述確定蚯蚓中土霉素殘留浸提劑的實驗方法，其特征在于：所述實驗確定的適合于蚯蚓中土霉素殘留一次浸提的浸提劑為體積比為4:1的甲醇與水的混合液。