[發明專利]一種基于LAMP技術檢測大豆尖鐮孢菌的方法及使用的引物組合物

有效

• 申請號: 201310291748.7
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN103352078A
• 公開（公告）日: 2013-10-16
• 發明（設計）人: 鄭小波;陸辰晨;戴婷婷;王源超;張海峰
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;傅婷婷

1.一種基于環介導等溫擴增技術檢測大豆尖鐮孢菌的引物組合物，其特征在于由大豆尖鐮孢LAMP分子檢測的四條特異性引物FIP、BIP、F3、B3，以及兩條用于加快反應速度的環引物LF、LB組成；其中，引物FIP序列如SEQ?ID?NO.1所示，引物BIP序列如SEQ?ID?NO.2所示，引物F3序列如SEQ?ID?NO.3所示，引物B3序列如SEQ?ID?NO.4所示，引物LF序列如SEQ?ID?NO.5所示，引物LB序列如SEQ?ID?NO.6所示。

2.權利要求1所述的引物組合物在檢測大豆尖鐮孢菌中的應用。

3.權利要求1所述的引物組合物在制備大豆尖鐮孢菌檢測試劑中的應用。

4.一種大豆尖鐮孢環介導等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于包括：權利要求1所述的引物組合物。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于所述的試劑盒包括1ml檢測溶液以及染料SYBR?Green?I25μL，所述的1mL檢測溶液每毫升包括：32mM正向內引物FIP、32mM反向內引物BIP、8mM正向外引物F3、8mM反向外引物B3、8mM環引物LF、8mM環引物LB、56mM?dNTPs、0.8M?Tris-HCl(pH8.8)、0.4mM?KCl、0.4mM(NH4)₂SO₄、0.24mM?MgSO₄、4%Triton?X-100、Bst?DNA?polymerase320單位，加入超純水至總體積為1mL。

6.一種基于環介導等溫擴增技術檢測大豆尖鐮孢菌的方法，其特征在于包括：取4μL待檢DNA溶液，加入18μL權利要求5所述的檢測溶液和3μL滅菌去離子水，總體積為25μL；反應程序為：62℃，60min；擴增產物的檢測：擴增后加入0.25μL染料SYBR?Green?I作為反應指示劑，肉眼觀察，以SYBR?Green?I的顏色變化做為結果判定標準：日光下，黃綠色表示檢測為陽性，存在大豆尖鐮孢，黃色表示檢測結果為陰性；或者在245nm波長紫外光照射觀察熒光，以熒光強弱做為結果判定標準：：強烈的綠色熒光表示檢測為陽性，存在大豆尖鐮孢，沒有熒光表示檢測為陰性。