[發明專利]一種高效液相色譜峰保留時間預測方法

有效

• 申請號: 201310291229.0
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN103439440A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 孫磊;金紅宇;馬雙成
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86;G01N30/91
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 姚亮

技術領域

本發明涉及一種高效液相色譜峰保留時間預測方法，屬于高效液相色譜檢測技術領域。

背景技術

中藥多指標成分的含量測定、指紋圖譜分析，化學藥（或抗生素）的有關物質檢查等工作中一個核心任務就是對數量眾多的目標化合物進行定性，如果均使用純的化學對照品，將給標準物質的制備和供應帶來極大的困難，也會顯著提高檢測成本。因此使用少量化學對照品通過某種方法來對其他色譜峰進行定性，具有重要的意義和應用價值。

目前，使用一個化學對照品的相對保留時間法是最常用的色譜峰定性法，在歐美及中國藥典中廣泛用于有關物質檢查，替代模式的多指標含量測定研究中也多使用。但由于色譜儀與色譜柱的差異，保留時間的預測值與實測值之間的偏差常常較大，實際應用中需限定色譜柱的型號，或選擇同類型、分離性能相似的色譜柱，多有不便。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的在于提供一種高效液相色譜峰保留時間預測方法，通過兩個化學對照品進行色譜峰定性，較之相對保留時間法，該方法能夠顯著減小定性的誤差，增加使用的色譜柱數量。

為達到上述目的，本發明提供了一種高效液相色譜（HPLC）峰保留時間預測方法，可以稱為雙標線性校正法，其包括以下步驟：

（1）利用高效液相色譜儀測定各種樣品的各種成分在多根不同的色譜柱上的實測保留時間，對在不同色譜柱上測定的同一樣品的各種成分的實測保留時間兩組兩組地進行線性擬合，分別繪制標準曲線并計算相關系數r，剔除（色譜柱測定的）r＜0.995的實測保留時間、（色譜柱測定的）偏離較大的實測保留時間以及（色譜柱測定的）導致色譜峰順序改變的實測保留時間，以剩下的色譜柱測定的實測保留時間的平均值作為各種成分的標準保留時間；

或者，以在所有色譜柱上測定的同一樣品的同一成分的實測保留時間的平均值為初擬標準保留時間，以所有成分的初擬標準保留時間與所有色譜柱上測定的同一樣品的所有成分的實測保留時間分別進行線性擬合，分別繪制標準曲線并計算相關系數r，剔除（色譜柱測定的）r＜0.995的實測保留時間、（色譜柱測定的）偏離較大的實測保留時間以及（色譜柱測定的）導致色譜峰順序改變的實測保留時間，以剩下的色譜柱測定的實測保留時間的平均值作為各種成分的標準保留時間；

（2）在每一個樣品的目標成分中選擇兩個成分作為該樣品的雙標對照成分；

（3）在一根色譜柱上運行待測樣品的供試品溶液和雙標對照成分的對照品溶液并利用高效液相色譜儀進行檢測，獲得供試品溶液的色譜圖，通過雙標對照成分的對照品對所獲得的色譜圖中的色譜峰進行定性，獲得雙標對照成分在供試品溶液中的實測保留時間；

（4）以雙標對照成分的標準保留時間為縱坐標、實測保留時間為橫坐標建立線性曲線，并得到兩點線性方程；

（5）將除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分的標準保留時間帶入所述兩點線性方程，獲得相應目標成分的預測保留時間，根據該預測保留時間對供試品的色譜圖中的其他色譜峰進行定性，得到相應目標成分的實測保留時間；

如果所有的除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分的標準保留時間和實測保留時間的偏差的絕對值均＞t₂，則預測失敗，更換步驟（3）中的色譜柱，并重復步驟（3）-（5）；

如果除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分之中至少有一個目標成分的標準保留時間和實測保留時間的偏差的絕對值≤t₂，則進入步驟（6）；

（6）以所有實測保留時間與預測保留時間的偏差的絕對值≤t₂的目標成分與雙標對照成分的標準保留時間為縱坐標、實測保留時間為橫坐標建立多點關系曲線并得到多點線性方程；

（7）將除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分的標準保留時間帶入多點線性方程，計算得到相應目標成分的新的預測保留時間；

（8）在供試品的色譜圖中找到與新的預測保留時間最接近的色譜峰，得到相應目標成分的新的實測保留時間，并計算各個目標成分的新的實測保留時間與新的預測保留時間的偏差的絕對值，以判斷多點線性方程是否包括了所有目標成分：如果所有的偏差的絕對值≤t₂，則進入下一步驟，如果有偏差的絕對值＞t₂，則返回步驟（6），以步驟（8）中計算的所有偏差的絕對值≤t₂的目標成分與雙標對照成分的標準保留時間為縱坐標、實測保留時間為橫坐標重新建立多點關系曲線并得到新的多點線性方程，重復步驟（6）-（8）；