[發明專利]一種高效液相色譜峰保留時間預測方法

有效

• 申請號: 201310291229.0
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN103439440A
• 公開（公告）日: 2013-12-11
• 發明（設計）人: 孫磊;金紅宇;馬雙成
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: G01N30/86
• 分類號: G01N30/86;G01N30/91
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 姚亮

1.一種高效液相色譜峰保留時間預測方法，其包括以下步驟：

（1）利用高效液相色譜儀測定各種樣品的各種成分在多根不同的色譜柱上的實測保留時間，對在不同色譜柱上測定的同一樣品的各種成分的實測保留時間兩組兩組地進行線性擬合，分別繪制標準曲線并計算相關系數r，剔除r＜0.995的色譜柱測定的實測保留時間、偏離較大的色譜柱測定的實測保留時間以及導致色譜峰順序改變的色譜柱測定的實測保留時間，以剩下的色譜柱測定的實測保留時間的平均值作為各種成分的標準保留時間；

或者，以在所有色譜柱上測定的同一樣品的同一成分的實測保留時間的平均值為初擬標準保留時間，以所有成分的初擬標準保留時間與所有色譜柱上測定的同一樣品的所有成分的實測保留時間分別進行線性擬合，分別繪制標準曲線并計算相關系數r，剔除r＜0.995的色譜柱測定的實測保留時間、偏離較大的色譜柱測定的實測保留時間以及導致色譜峰順序改變的色譜柱測定的實測保留時間，以剩下的色譜柱測定的實測保留時間的平均值作為各種成分的標準保留時間；

（2）在每一個樣品的目標成分中選擇兩個成分作為該樣品的雙標對照成分；

（3）在一根色譜柱上運行待測樣品的供試品溶液和雙標對照成分的對照品溶液并利用高效液相色譜儀進行檢測，獲得供試品溶液的色譜圖，通過雙標對照成分的對照品對所獲得的色譜圖中的色譜峰進行定性，獲得雙標對照成分在供試品溶液中的實測保留時間；

（4）以雙標對照成分的標準保留時間為縱坐標、實測保留時間為橫坐標建立線性曲線，并得到兩點線性方程；

（5）將除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分的標準保留時間帶入所述兩點線性方程，獲得相應目標成分的預測保留時間，根據該預測保留時間對供試品的色譜圖中的其他色譜峰進行定性，得到相應目標成分的實測保留時間；

如果所有的除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分的標準保留時間和實測保留時間的偏差的絕對值均＞t₂，則預測失敗，更換步驟（3）中的色譜柱，并重復步驟（3）-（5）；

如果除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分之中至少有一個目標成分的標準保留時間和實測保留時間的偏差的絕對值≤t₂，則進入步驟（6）；

（6）以所有實測保留時間與預測保留時間的偏差的絕對值≤t₂的目標成分與雙標對照成分的標準保留時間為縱坐標、實測保留時間為橫坐標建立多點關系曲線并得到多點線性方程；

（7）將除雙標對照成分之外的待測樣品的目標成分的標準保留時間帶入多點線性方程，計算得到相應目標成分的新的預測保留時間；

（8）在供試品的色譜圖中找到與新的預測保留時間最接近的色譜峰，得到相應目標成分的新的實測保留時間，并計算各個目標成分的新的實測保留時間與新的預測保留時間的偏差的絕對值，以判斷多點線性方程是否包括了所有目標成分：如果所有的偏差的絕對值≤t₂，則進入下一步驟，如果有偏差的絕對值＞t₂，則返回步驟（6），以步驟（8）中計算的所有偏差的絕對值≤t₂的目標成分與雙標對照成分的標準保留時間為縱坐標、實測保留時間為橫坐標重新建立多點關系曲線并得到新的多點線性方程，重復步驟（6）-（8）；

（9）檢測所有目標成分的標準保留時間與新的預測保留時間的偏差的絕對值是否≤t_m，且t_m＜t₂：如果是，則預測成功；如果不是，則預測失敗；預測失敗時，更換步驟（3）中的色譜柱，重復步驟（3）-（9）。

2.根據權利要求1所述的高效液相色譜峰保留時間預測方法，其中，所述樣品為中藥、天然植物藥、化學藥、食品或者抗生素。

3.根據權利要求1所述的高效液相色譜峰保留時間預測方法，其中，在利用高效液相色譜儀測定各種樣品的各種成分在多根色譜柱上的實測保留時間時，在每一根色譜柱均至少進樣3次，并且所得到的實測保留時間的RSD≤2%。

4.根據權利要求1所述的高效液相色譜峰保留時間預測方法，其中，所選擇的雙標對照品成分的標準保留時間靠近樣品的目標成分的保留時間段的兩端。

5.根據權利要求1或4所述的高效液相色譜峰保留時間預測方法，其中，將樣品的目標成分的保留時間段等分為四段，所選擇的雙標對照品成分的標準保留時間位于第一個分界點和第三個分界點附近。