[發明專利]鴨坦布蘇病毒病E-ELISA檢測試劑盒及其制備方法在審
| 申請號： | 201310290098.4 | 申請日： | 2013-07-11 |
| 公開（公告）號： | CN104280551A | 公開（公告）日： | 2015-01-14 |
| 發明（設計）人： | 張云;劉明;陳志峰 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所 |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543 |
| 代理公司： | 中科專利商標代理有限責任公司 11021 | 代理人： | 王旭 |
| 地址： | 150001 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鴨坦布蘇 病毒 elisa 檢測 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
1.一種鴨坦布蘇病毒病E-ELISA檢測試劑盒，所述試劑盒包含標準陽性對照鴨血清、標準陰性對照鴨血清、鴨坦布蘇病毒E蛋白所包被的ELISA板、羊抗鴨酶標二抗及其他試劑。
2.權利要求1所述的試劑盒，其中所述標準陽性對照鴨血清為提取自用鴨坦布蘇病毒免疫的SPF鴨的血清，所述標準陰性對照鴨血清為提取自SPF鴨的血清。
3.權利要求1所述的試劑盒，其中所述鴨坦布蘇病毒E蛋白所包被的ELISA板通過用在原核表達系統中重組表達的鴨坦布蘇病毒E蛋白包被ELISA板制得。
4.權利要求3所述的試劑盒，其中所述鴨坦布蘇病毒E蛋白通過將SEQ?ID?No.1所示的編碼坦布蘇病毒E蛋白的核苷酸序列克隆在原核細胞表達載體中并在原核細胞中表達制得。
5.權利要求1所述的試劑盒，其中所述羊抗鴨酶標二抗為HRP標記的羊抗鴨二抗。
6.權利要求1所述的試劑盒，其中所述其他試劑包括樣品稀釋液、10×濃縮洗液、TMB底物顯色液、終止液。
7.權利要求1所述的試劑盒，所述試劑盒的檢測方法包括：
(1)反應步驟：將待測鴨血清樣品、標準陽性對照鴨血清和標準陰性對照鴨血清分別加入所述鴨坦布蘇病毒E蛋白所包被的ELISA板的獨立的孔中，在37℃反應1h；
(2)與二抗反應步驟：將每孔洗滌后，分別加入所述羊抗鴨酶標二抗，在37℃反應1h；
(3)顯色步驟：將每孔洗滌后，分別加入TMB底物顯色液進行顯色反應；
(4)讀數步驟：終止顯色反應，在酶標儀上讀數；
(5)判斷步驟：待測鴨血清樣品反應孔的OD值與標準陰性對照鴨血清反應孔的OD值的比例大于等于2.1時，表示待測鴨血清樣品為陽性，說明待測鴨感染了鴨坦布蘇病毒；上述比值小于2.1時，表示待測鴨血清樣品為陰性，說明待測鴨沒有感染鴨坦布蘇病毒。
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