[發明專利]CRP非免疫納米金檢測試紙條及其制備

無效

• 申請號: 201310289752.X
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN104280550A
• 公開（公告）日: 2015-01-14
• 發明（設計）人: 游紹進;陳瓊;張鉦;李為
• 申請（專利權）人: 蘇州友林生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.檢測CRP的非免疫納米金試紙條的制備方法，所述試紙條包括樣品墊、納米金結合墊、硝酸纖維膜、吸水墊和支撐板，其特征在于，該制備方法包括：

A，將標記有生物素的第一寡核苷酸標記到納米金顆粒上，獲得第一寡核苷酸標記的納米金顆粒；

B，將步驟A獲得的第一寡核苷酸標記的納米金顆粒噴在結合墊上，獲得納米金結合墊；

C，將第二寡核苷酸噴在硝酸纖維膜上形成檢測線，將親和素(優選是鏈球菌親和素)噴在硝酸纖維膜上形成質控線，獲得帶有檢測線和質控線的硝酸纖維膜，其中檢測線和質控線間距為0.4-1cm，優選為0.6cm；和

D，以樣品墊、納米金結合墊、帶有檢測線和質控線的硝酸纖維膜和吸水墊這4部件依次為序排列，相鄰兩部件間邊緣接觸或重合(優選重合1-3mm，如重合2mm)，固定(如熱層壓固定或粘合固定)在支撐板上，制成該檢測CRP的非免疫納米金檢測試紙條，

其中，第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列不同。

2.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中樣品墊是經過樣品墊處理液浸泡處理的，優選其中樣品墊處理液是含1-5％(W/W)酪蛋白、0.1-1％(W/W)聚乙烯醇和0.05-0.5％(W/W)吐溫-20的PBS溶液(pH7.0-7.6)，更優選其中樣品墊處理液是含3％(W/W)酪蛋白、0.5％(W/W)聚乙烯醇和0.1％(W/W)吐溫-20的20mMPBS溶液(pH7.2)。

3.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中第一寡核苷酸標記的納米金顆粒是稀釋成0.05-2mg/ml(優選0.25mg/ml)的溶液以10-100微升/cm(優選50微升/cm)的量噴在結合墊上。

4.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中第二寡核苷酸是稀釋成0.1-2mg/ml(優選0.5mg/ml)的溶液以0.5-5微升/cm(優選1微升/cm)的量噴在硝酸纖維膜上。

5.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中親和素是稀釋成0.2-3mg/ml(優選lmg/ml)的溶液以0.5-5微升/cm(優選1微升/cm)的量噴在硝酸纖維膜上。

6.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中步驟C是將第二寡核苷酸噴在硝酸纖維膜上形成檢測線，將親和素(優選是鏈球菌親和素)噴在硝酸纖維膜上形成質控線，晾干后紫外線交聯并浸泡在封閉液中，然后烘干，獲得帶有檢測線和質控線的硝酸纖維膜。

7.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中第一寡核苷酸和第二寡核苷酸的序列分別選自如下序列：

5’-atgggggggtatgatt-3’；

5’-atgggtgggtatgggt-3’；

5’-aagcgggtgggtgtgt-3’；

5’-tgggtggggggtgggggttgttgggctgtt-3’；

5’-tgggtgggcggggtgggttgttgggcggtt-3’；

5’-tgggggagggggcggggccgtagggtgggt-3’；

5’-cgggtggggggtgggggtcgccgggtcgct-3’；或

5’-ggggtggggggtgggggtagttgggtcgct-3’。

8.權利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中納米金結合墊與硝酸纖維膜重合在硝酸纖維膜靠近檢測線的一側，而且吸水墊與硝酸纖維膜重合在硝酸纖維膜靠近質控線的一側。

9.權利要求1-9之任一所述的制備方法制備的納米金試紙條，優選該納米金試紙條是如實施例1、2和/或3制備的。

10.權利要求9所述的納米金試紙條在制備用于檢測CRP的試劑盒中的應用，優選其中該試劑盒還包括標準圖樣片。