[發明專利]防治蘋果果實輪紋病的生防菌婁徹氏鏈霉菌A-1及其生防制劑

無效

• 申請號: 201310289746.4
• 申請日: 2013-07-11
• 公開（公告）號: CN103789222A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 王彩霞;李桂舫;李保華;張清明;董向麗
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A01N63/00;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種防治蘋果果實輪紋病的生防菌婁徹氏鏈霉菌(Streptomyces?rochei)A‐1，于2012年1月12日保藏于：中國典型培養物保藏中心，保藏號：CCTCC?NO:M2012008。

2.一種利用權利要求1所述的婁徹氏鏈霉菌(Streptomyces?rochei)A‐1制備的生防菌劑。

3.根據權利要求2所述的生防菌劑，其特征在于用于防治蘋果果實輪紋病。

4.根據權利要求2所述的生防菌劑，其特征在于所述生防菌劑的制備方法如下：

1）培養基的制備：

高氏一號培養基：可溶性淀粉20g，KNO₃1.0g，K₂HPO₄0.5g，MgSO₄·7H₂O0.5g，FeSO₄·7H₂O0.01g，瓊脂15‐20g，蒸餾水1000mL，pH7.2‐7.4，121℃高壓蒸汽滅菌20min；

發酵培養基：黃豆餅粉10.0g，葡萄糖10.0g，NaCl2.5g，CaCO₃2.0g，蛋白胨3.0g，蒸餾水1000mL，pH值調節為7.0‐7.2，分裝于250mL三角瓶中，裝液量為80mL，121℃高壓蒸汽滅菌20min；

2）婁徹氏鏈霉菌株的活化：將菌株按無菌操作要求劃線接種于高氏一號培養基中，28℃恒溫培養5‐7d；

3)婁徹氏鏈霉菌菌株的液體培養：挑取步驟2）中活化的菌株，接種于所述的發酵培養基中，28℃、180r/min振蕩培養72h，得到發酵種子液。將所述種子液按10%的接種量接種到所述的發酵培養基中，28℃、180r/min，繼續振蕩培養72h，獲得濃度為10⁶cfu/mL的婁徹氏鏈霉菌菌株細胞培養液；

4）婁徹氏鏈霉菌生防制劑的制備：將步驟2）中活化的菌株打取直徑6mm的菌餅；將步驟3）中制備的細胞培養液，在4℃條件下，12000r/min離心10min，收集上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，上清液即為無菌發酵濾液；沉淀用無菌水重新懸浮，得到10⁶cfu/mL的菌懸液；

5）步驟4）中所述的菌餅、發酵濾液和菌懸液均為生防制劑。