[發明專利]一種γ-氨基丁酸快速檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201310287428.4
• 申請日: 2013-07-10
• 公開（公告）號: CN103487389A
• 公開（公告）日: 2014-01-01
• 發明（設計）人: 姜毓君;滿朝新;閆天文
• 申請（專利權）人: 黑龍江省乳品工業技術開發中心
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 何自剛;王玉松

1.一種γ-氨基丁酸快速檢測試劑盒，其特征在于，每200μL反應體系含有：25-40μg?GABase、2-3mM?NADP+、5-15mM二硫蘇糖醇、1-4mMα-酮戊二酸、500-800mM硫酸鈉、70-100mM?Tris-Hcl。

2.根據權利要求1所述試劑盒，其特征在于，每200μL反應體系組成如下：Tris-Hcl：80mM、NADP⁺：1.4mM、二硫蘇糖醇：10mM、α-酮戊二酸：2.0mM、硫酸鈉：750mM、GABase：30μg。

3.一種γ-氨基丁酸快速檢測方法，其特征在于，步驟如下：

1）每200μL反應體系含有：25-40μg?GABase、2-3mM?NADP+、5-15mM二硫蘇糖醇、1-4mMα-酮戊二酸、500-800mM硫酸鈉、70-100mM?Tris-Hcl；

2）將預處理后的樣品加入上述反應體系反應，在波長340nm檢測吸光度；

3）將配置好的不同濃度梯度的GABA標準樣品添加到反應體系中，建立標準曲線，未知樣品中GABA含量的根據標準曲線計算得到。

4.根據權利要求3所述方法，其特征在于，樣品加入反應體系后反應溫度為30℃。

5.根據權利要求3所述方法，其特征在于，樣品加入反應體系后反應時間為60min。

6.根據權利要求3所述方法，其特征在于，所述200μL反應體系組成如下：

Tris-Hcl：80mM

NADP⁺：1.4mM

二硫蘇糖醇：10mM

α-酮戊二酸：2.0mM

硫酸鈉：750mM

GABA酶：30μg

樣品溶液：20μL。

7.根據權利要求3所述方法，其特征在于，具體步驟如下：

1）200μL反應體系：

Tris-Hcl：80mM

NADP⁺：1.4mM

二硫蘇糖醇：10mM

α-酮戊二酸：2.0mM

硫酸鈉：750mM

GABA酶：30μg

樣品溶液：20μL

2)將預處理后的樣品加入上述反應體系反應，反應溫度為30℃，在波長340nm檢測吸光度；

3）將配置好的不同濃度梯度的GABA標準樣品添加到反應體系中，建立標準曲線，未知樣品中GABA含量的根據標準曲線計算得到。

8.根據權利要求3所述方法，其特征在于，具體步驟如下：

1）對于發酵酸奶中γ-氨基丁酸的檢測，需將發酵酸奶樣品進行前處理，前處理方法如下：取50g乳酸菌發酵奶，10000rpm離心20min，取40mL上清液加入10mL10％的磺基水楊酸，0.45um濾膜過濾，4℃冷藏靜置60min，14500rpm離心15min，0.45um濾膜過濾，使用旋轉蒸發儀對樣品濃縮，濃縮液置于4℃備用；

2）200μL反應體系：

Tris-Hcl：80mM

NADP⁺：1.4mM

二硫蘇糖醇：10mM

α-酮戊二酸：2.0mM

硫酸鈉：750mM

GABA酶：30μg

樣品溶液：20μL

3）將預處理后的樣品加入上述反應體系反應，反應溫度為30℃，在波長340nm檢測吸光度；

4）將配置好的不同濃度梯度的GABA標準樣品添加到反應體系中，建立標準曲線，未知樣品中GABA含量的根據標準曲線計算得到。