[發明專利]一種杜仲籽粕蛋白酶解制備ACE抑制肽的方法

無效

• 申請號: 201310286294.4
• 申請日: 2013-07-08
• 公開（公告）號: CN103320488A
• 公開（公告）日: 2013-09-25
• 發明（設計）人: 黃群;麻成金;楊志偉;彭勉芳;唐謙為;王玨
• 申請（專利權）人: 吉首大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/34
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明屬于ACE抑制肽制備領域，尤其涉及一種杜仲籽粕蛋白酶解制備ACE抑制肽的方法。

背景技術

杜仲(EucomMol/Lia?Ulmoides?Oliv)是我國特有的名貴中藥材和經濟樹種，主要分布在湖南、湖北、陜西、四川、重慶、貴州等西部省市，武陵山區建有規?；亩胖偕唐飞a基地，僅湖南西部地區就有杜仲40萬畝，成片20余萬畝，開發應用前景十分廣闊。長期以來，對杜仲的利用僅僅限于杜仲皮，杜仲果實為翅果，扁平，蛋白質含量約15％，含有18種氨基酸，其中人體必需氨基酸齊全且占總氨基酸含量的32.3％，谷氨酸含量最高。

心腦血管疾病已成為危害人類健康的頭號殺手，而高血壓是最常見的心血管疾病之一。中國是高血壓病高發的國家之一，2012年我國成人高血壓患病率為18.6％，患者數量達1.6億，且每年近100萬患者因此病而死亡。高血壓成為繼腫瘤之后的第二個威脅人類健康的慢性疾病，如何預防和治療高血壓己成為全社會共同關注的焦點。

目前，對于高血壓病多是采用合成的ACE抑制劑作為主要的治療藥物，但存在副作用明顯、長期服藥導致依賴性等不安全因素。因此，尋找安全性高、降血壓效果好的ACE抑制劑已成為國內外研究者所關注的重要課題。

食物蛋白質是人體新陳代謝過程中極為重要的營養物質，具有提供構成機體所需氨基酸和能量供應等功能。有關研究表明，以數個氨基酸結合而成的功能肽具有比游離氨基酸更好的消化吸收性能；功能肽還有原蛋白質或其組成氨基酸所沒有的廣泛的生理調節功能，如促進鈣吸收、降血壓、降低膽固醇、免疫調節等，特別是具有降血壓活性的ACE抑制肽成為生物活性肽研究領域的熱點之一。

血管緊張素轉化酶(Angioensin?Converting?Enzyme，ACE，EC3.4.15.1)是一種含鋅的二肽羧酶，能被氯離子激活并具有較寬的底物特異性。ACE廣泛分布于哺乳動物的組織中，尤其在血管內皮細胞、上皮吸收細胞、神經上皮細胞及雄性生殖細胞中，ACE以膜結合的胞外酶形式存在。在腎素-血管緊張素系統(RAS)和激肽釋放酶-激肽系統(KKS)中，ACE對機體血壓和心血管功能起著重要的調節作用。在RAS中，ACE處于核心地位，起限速酶的作用。ACE催化不具有活性的血管緊張素I(十肽)轉化為具有強烈收縮血管作用的血管緊張素II(八肽)，同時，血管緊張素II也能刺激促進醛固酮的分泌進而促進腎臟對水、Na⁺、K⁺的重吸收，引起鈉貯量和血容量的增加，使血壓升高。在KKS中，ACE能催化舒緩激肽的降解。另外，ACE還能催化與心血管系統具有相互作用的神經肽、腦啡肽等的降解。因此，抑制ACE活性被認為是治療高血壓重要而有效的方法，在研發治療高血壓藥物過程中，ACE的抑制成為重要的靶標。目前，高效、特異的ACE抑制劑在治療高血壓病和充血性心力衰竭中發揮著重要作用。

酶解法是目前制備ACE抑制肽應用最多的方法，其原理是植物性或動物性原料經預處理后得到含量較高的蛋白質，然后加入特異性蛋白酶水解一定時間，分離獲得具ACE抑制活性的多肽產物。Yun?HG和Kim?SK(2001)以鰭魚皮為原料提取魚皮凝膠，然后以堿性蛋白酶、鏈霉蛋白酶、膠原酶順序進行分步水解，純化獲得兩種三肽GPL和GPM。Qian?zJ(2007)分別使用堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、a-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶水解牛蛙肌肉蛋白，其中堿性蛋白酶水解物顯示最高的ACE抑制活性，對其純化后獲得ACE抑制活性較高的十二肽(GAAELPCSADWW)。王毅梅(2011)以草魚肉為原料，通過堿性蛋白酶水解制備ACE抑制三肽(LPM)，IC₅₀值達0.00534mg/mL。

自發現食源性ACE抑制肽以來，因其安全性高、無副作用、人體吸收快等優點而備受科研工作者關注。隨著對其制備方法、作用機理等研究的深入，ACE抑制肽在開發降血壓功能的保健食品中具有極大的應用前景，日本己經進行ACE抑制肽的規?；a。然而，我國目前對于食源性ACE抑制肽的研究仍處于起步階段，對于原料的來源、制備工藝、產品精制、實驗室成果產業化等方面仍然存在較多的問題。